西瓜SRAP2PCR反应程序的建立与体系的优化.pdf

华北农学报 ·2 0 0 8 , 2 3 ( 3 ) : 3 84 1 西瓜 SRAPPCR 反应程序的建立 与体系的优化 1 2 1 1 1 李晓慧 ,王从彦 ,徐小利 ,常高正 ,张四普 ( 1. 河南省农业科学院 园艺研究所 ,河南 郑州 　450002 ;2 . 河南农业大学 生命科学学院 ,河南 郑州 　450002) 　　摘要 : 以西瓜品种中华拳王为试材 ,探索了西瓜 SRAPPCR 反应程序 ,并对西瓜 SRAPPCR 反应体系的各影响因子 进行了梯度设置试验 ,筛选和建立了可扩增多态性高 、重复性好 、带型清晰的最佳 SRAPPCR 反应程序和体系 。反应 程序为 :94 ℃预变性 5 min ;94 ℃变性 1 min ,35 ℃退火 1 min ,72 ℃延伸 1 min ,共 5 个循环 ;94 ℃变性 1 min ,50 ℃退火 1 ( μ) 2 + min ,72 ℃延伸 1 min ,共 35 个循环 ;72 ℃延伸 5 min ;4 ℃保存 。反应体系 Total 为 15 L :DNA 100 ng ,Mg 2 . 0 mmol/ L , dNTPs 0 . 3 mmol/ L ,Primer 60 ng , Taq polymerase 0 . 75 U 。结果表明 ,该程序和体系能很好地满足西瓜基因组 SRAP 扩增 的要求 ,SRAP 标记应用于西瓜遗传研究是可行的。 关键词 :西瓜 ;SRAP ;体系优化 ( ) 中图分类号 :S651 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 7091 2008 03 - 0038 - 04 The Optimization of SRAPPCR Amplif ication Progra m and System for Citrullus lanatus L I Xiaohui1 ,WAN G Congyan2 ,XU Xiaoli1 ,CHAN G Gaozheng1 ,ZHAN G Sipu1 ( 1. Institute of Horticulture ,Henan Academy of Agriculture Sciences ,Zhengzhou 　450002 ,China ; 2 . College of Life Sciences ,Henan Agricultural University ,Zhengzhou 　450002 ,China) Abstract :The SRAPPCR reaction procedure and system for amplifying the watermelon genomic DNA was optimized using gradient experiment ,so as to establish the optimum SRAPPCR reaction conditions with high polymorphism ,good re peatability and clear band pattern . The optimum SRAPPCR reaction procedure was :predenaturation at 94 ℃for 5