植物组织培养实验基本步骤。。.docVIP

植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 8.250g 、KNO3 9.500g 、KH2PO4 0.850g 、 MgSO4·7H2O 1.850g 、CaCl2·2H2O 2.20g，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 1.1150g 、ZnSO4·7H2O 0.4300g 、 H3BO3 0.3100g 、KI 0.0415g 、CuSO4·5H2O 0.00125g、 CoCl2·6H2O 0.00125g，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称 FeSO4·7H2O 1.390g和Na2·EDTA 1.865g，把FeSO4·7H2O和 Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇 5.000g 、维生素B1 0.025g 、烟酸 0.025g 、甘氨酸 0.100g 、维生素B6 0.005g 、蔗糖 15.000g ，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织 （2）、常见生长素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）。NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。 （3）、溶解方法：称25mg吲哚乙酸（IAA），用少量1mol/L NaOH或95％酒精预溶解，再加蒸馏水定容至25ml，摇匀。 （4）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 2、细胞分裂素 组织培养中，细胞分裂素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。 （1）、常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、玉米素（ZT）、噻二唑苯基脲（TDZ ） （2）、溶解方法：称25mg 6－苄氨基嘌呤（6－BA），用少量（1ml）1mol/L HCL预溶解，再加蒸馏水定容25ml，摇匀。 （3）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 3、赤霉素（GA3） （1）、溶解方法：用少量95％酒精预溶解，再加蒸馏水定容。 （2）、保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 （3）、赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解 （4）、灭菌：高温易分解，要过滤灭菌 4、脱落酸 （1）、溶解：易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。 （2）、保存：具有热稳定性，但容易发生光解。配成一定浓度后，冰箱冷藏保存 三、培养基的制备与灭菌 （一）、培养基的制备 1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。 2、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母液加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体积。 3、