动物细胞融合-实验报告.docVIP

实验二：动物细胞融合 一、实验目的 1、了解动物细胞融合的常用方法——聚乙二醇诱导细胞融合的基本原理。 2、学习化学融合的基本操作过程。 二、实验用品 1、材料 鸡血红细胞 2、试剂 50%PEG、Hank’s溶液（pH7.4）、Alsever’s细胞保存液0.85%氯化钠溶液。 3、器材 普通光学显微镜、离心机、量筒、载玻片、盖玻片离心管、废液缸等。 三、实验原理 细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。 1、病毒诱导融和 仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可 诱导细胞发生融合。 2、化学诱导融合 很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG是广泛使用的化学融合剂。 3、电激诱导融合 包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。 PEG，又名聚乙二醇，是目前应用做多的一种化学促溶剂。其优点是使用方便，活动稳定，容易制备和控制。 四、实验步骤 1、鸡血细胞的制备与保存。 2、取鸡血1ml+0.85%的NaCl溶液4ml，在1000r/min的离心机内离心5分钟。 3、将上一步的沉降血球（去上清液后，约0.1-0.2ml），加入GKN液至4ml，制成细胞悬液。 4、取细胞悬液1ml稀释到10倍，共10ml 5、取上步得到的细胞悬液1ml，加0.5ml的PEG液，静置5min后摇匀。 6、吸取细胞悬液，在凹面载玻片上滴一滴，加入Janus green染液，用牙签搅匀，染色3min后用滴管滴到盖有盖玻片的血细胞计数板，在显微镜下观察并计数。 五、实验结果 计数结果： 右上角：14个细胞核，6个融合 右下角：20个细胞核，8个融合 左上角：13个细胞核，7个融合 左下角：10个细胞核，6个融合 中间格：17个细胞核，8个融合 融合率=47.3% 结果分析及讨论 1、实验速度较慢，鸡血细胞失去活性。 2、结果中由于PEG的作用，细胞变形情况较为严重。 3、离心速度较小，时间较短使细胞融合不充分。 4、、因为PEG有的凝集作用，红细胞发生多细胞的凝集反应。 5、、因融合时间短的缘故，没有观察到细胞的完全融合。