食品中硼酸的快速检测姜黄素比色法征求意见稿1范围本.doc

附件9 食品中硼酸的快速检测 姜黄素比色法 （征求意见稿） 范围 本方法规定了食品中硼酸的姜黄素比色快速检测方法。 本方法适用于粮食制品、淀粉及淀粉制品、糕点、豆制品、速冻食品（速冻面米食品、肉丸、蔬菜丸）中硼酸的快速测定。 原理 本方法采用姜黄素比色法的原理，通过超声辅助用水提取样品中硼酸，用乙基己二醇-三氯甲烷溶液对样品中的硼酸进行快速的富集、萃取，利用硫酸与姜黄素混合生成的质子化姜黄与硼酸反应生成红色产物。溶液颜色的深浅与样品中硼酸的含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，确定样品中硼酸的含量。 试剂与材料 除另有规定外，本方法所用的试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。 试剂 硫酸。 无水乙醇。 亚铁氰化钾。 乙酸锌。 姜黄素（CAS:458-37-7），纯度≥ 99%。 冰乙酸。 2-乙基-1,3-己二醇（色谱纯）。 三氯甲烷（色谱纯）。 硫酸溶液（1+1）：取等体积的硫酸（3.1.1）与水，将硫酸缓慢加入到水中，并用玻璃棒不断的搅拌，待冷却后装入塑料容器中。 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾（3.1.3），用水溶解并稀释至100mL。 乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌（3.1.4），用水溶解并稀释至100mL。 2-乙基-1,3-己二醇-三氯甲烷溶液(EHD-CHCl3溶液)：称取2-乙基-1,3-己二醇(3.1.7) 10.6g，用三氯甲烷(3.1.8)溶解并稀释至100mL，此溶液保存于塑料容器中。 姜黄-冰乙酸溶液：称取姜黄素(3.1.5)40mg，溶于100mL冰乙酸(3.1.6)中，此溶液保存于塑料容器中，该溶液需临用新制。 参考物质 硼酸参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1。 表1 硼酸参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量 中午名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 硼酸 Boric Acid 10043-35-3 H3BO3 61.8 标准溶液配制 硼酸标准储备液（1000μg/mL）：准确称取在硫酸干燥器中干燥5h以上的硼酸标准品适量，用水溶解并配制成1000μg/mL的标准储备液，保存于塑料容器中。 硼酸标准溶液（100μg/mL）：取硼酸标准储备液10.0mL，加水定容至100mL，保存于塑料容器中。所配制溶液于0℃～4℃冰箱中可储存3个月。 材料 硼酸快速检测试剂盒，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。 仪器与设备 电子天平：感量为0.01g。 样品捣碎机。 超声仪。 离心机：转速≥4000r/min。 氮气吹干仪或空气吹干仪：温度控制≥60℃。 涡旋振荡器。 移液器：200μL、1mL、10 mL。 分析步骤 试样的制备 取适量样品，充分粉碎混匀。 试样的提取 准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.1g），置于50mL离心管中，准确加水7mL，加入硫酸溶液（3.1.9）2mL，涡旋振荡提取1min后超声提取15min，期间振摇2～3次，加入0.5mL亚铁氰化钾溶液（3.1.10）与0.5mL乙酸锌溶液（3.1.11），混匀后于4000r/min离心5min(若离心效果不佳，可适当提高离心转速)，准确吸取1.0mL上清液于2.0 mL离心管中，向离心管中加入EHD-CHCl3溶液（3.1.12）0.5mL，上下颠倒振摇15～20次，静置分层（若有乳化现象，可低速离心），将上层溶液去除干净，取下层液体100μL于2.0mL离心管中，加入400μL姜黄素-冰乙酸溶液（3.1.13），再加入20μL硫酸溶液（3.1.9），于60℃～70℃水浴中氮气（或空气）吹至近干，加入1mL无水乙醇，振摇使残渣全部溶解，为待测液。 注:粉丝、粉条等干基样品加入水和硫酸溶液后需浸泡15min，再进行后续处理。 测定步骤 将待测液与标准色阶卡目视比色，15min内判读结果。需进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。 注意：整个试验避免在阳光直射的地方操作。 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验（或加标质控试验）。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。 空白试验 称取空白样品，按照5.1～5.3步骤与样品同法操作。 质控样品试验（或加标质控试验） 质控样品 硼酸质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质模拟实际生产工艺生产的，含有一定量硼酸(可考虑基质本底最大可能硼酸量)，并可稳定保存的样品。样品需经参比方法确认质控样品中硼酸的含量。 加标质控样品 硼酸加标质控样品：准确称取空白试样2g（精确至0.1g），加入适量硼酸标准溶液（1000μg/mL 或100μg/mL）（3.3），使在不同基质样品中硼酸含量与5.4.2.1相同。 质控样品（或加标质控样品）按5.1和5.2步骤与样品同法操作。