黑鲷抗菌肽hepcidin在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性.pdf

第 48 卷 　第 5 期 ( ) Vol . 48 　No . 5 厦门大学学报 自然科学版 2009 年 9 月 J our nal of Xiamen U niver sit y (N at ural Science) Sep . 2009 黑鲷抗菌肽 hepcidin 在毕赤酵母中的表达 及其抗菌活性 1 1 1 2 蔡晶晶 , 杨 　明 , 蔡 　灵 ,郭 　庆 , 2 1 潘瑞珍 ,王克坚 ( 1. 厦门大学 海洋与环境学院 ,近海海洋环境科学国家重点实验室 ,福建 厦门 36 1005 ; 2 . 福建省华龙饲料有限公司 ,福建 福州 350002) 摘要 :鱼类抗菌肽 hep cidin 具有广谱抗菌活性. 利用 PCR 技术扩增获得了黑鲷抗菌肽 hep cidin (A Shep c2) 的前体肽和 ( ) 成熟肽 cDN A 序列 ,片段大小约 250 bp . 将其与毕赤酵母 P ichi a p as toris p PIC9 K 质粒连接 ,构建了分泌表达载体 p PIC9 K/ A Shepc2 . 电击法转化重组表达载体 ,经过 G4 18 筛选和选择性培养基 以及 PCR 鉴定 ,得到的克隆子都为 Mut + . 以甲醇诱导 p P IC9 K/ A Shep c2 ,分泌表达上清中获得 10 ku 左右的表达产物 ,与预期的目的蛋白黑鲷 hep cidin 的 前体肽和成熟肽的大小相符. 表达试验证明 ,随时间的延长 ,表达产物量增多 ,至 120 h 达到高峰. 表达产物具有很强的 热稳定性. 用抑菌圈法测定重组蛋白 ProA Shep c2 的抗菌活性 ,发现能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长. 关键词 :黑鲷抗菌肽 hep cidin A Shep c2 ;毕赤酵母 ;分泌表达 ;抗菌活性 中图分类号 :R 392 . 11 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 (2009) 　　Hep cidin 是一类富含半胱氨酸 、具有二硫键结构 本实验室于 2007 年报道从我国养殖黑鲷中克隆 ( ( ) 的性质独特的多肽. 2000 年 , Krau se 等首先从人 H o 获得了 7 个 hep cidinlike 基因 A Shep c 1～7 ,在细 m o s ap iens ) 血液中分离纯化了这一多肽 ,称之为肝脏 菌人工感染下黑鲷抗菌肽 hep cidin m RN A