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PAGE FILENAME gaojianmoban 2 - 生物化学与生物物理进展 Prog. Biochem. Biophys. PAGE /cn/ch/common/create_pdf.aspx?file_no=2017 /cn/ch/common/create_pdf.aspx?file_nolag=1 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 发布日期：2018-05-30 LncRNA MIR31HG通过诱导细胞周期阻滞 抑制食管鳞癌细胞增殖活性 陈晓琦, 陈欣菊??通讯联系人：陈欣菊，女，本科，主治医师，主要研究方向：消化道肿瘤. ??通讯联系人：陈欣菊，女，本科，主治医师，主要研究方向：消化道肿瘤. Tel:, E-mail: E-mail：xinj_chen@163.com. 收稿日期：2018-03-01，接受日期：2018-05-30 摘要 本研究探讨lncRNA MIR31HG对食管鳞癌细胞增殖活性的影响. 利用定量PCR检测MIR31HG在食管鳞癌标本及其癌旁组织、人食管上皮细胞系Het-1A和食管鳞癌细胞系Eca-109、EC-1、KYSE30中的表达. 采用过表达质粒pcDNA3.1-MIR31HG在食管鳞癌细胞系中过表达MIR31HG，MTT法和SRB法检测细胞增殖率，细胞周期分析试剂盒检测细胞周期进程，Caspase3活性检测试剂盒分析Caspase3活性，PCR和Western blot 法检测 p53、Caspase3及 Bcl-2 的mRNA和蛋白表达水平. 结果显示，食管癌组织中MIR31HG表达水平显著低于癌旁组织(P0.05); 与Het-1A细胞相比，Eca-109、EC-1、KYSE30细胞中MIR31HG的表达均显著下调（P0.05），提示MIR31HG可能介导食管癌的发生发展. 转染pcDNA3.1-MIR31HG可显著上调食管癌细胞中MIR31HG的mRNA表达（P0.01），且MIR31HG过表达可显著抑制食管癌细胞增殖活性（P0.05），减少S期细胞数（P0.05），增加G1期细胞数（P0.05），提示MIR31HG可能通过阻碍细胞周期G1期-S期进程抑制食管癌细胞增殖活性. 此外，MIR31HG过表达显著增加Caspase3活性，增加Caspase3和p53的mRNA和蛋白表达水平，同时抑制Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平. 这表明，MIR31HG可通过抑制食管癌细胞的增殖活性阻碍食管癌的发生发展，这可能为食管癌的诊断和治疗提供新策略. 关键词 LncRNA,MIR31HG,食管鳞癌,细胞增殖,细胞周期 学科分类号 R735.1 食管癌是最常见的消化道肿瘤，其发病率和死亡率位于我国癌症前列[1]. 近十年来，食管鳞状细胞癌（ESCC）已发展成为最常见的食管癌类型[2]，是世界范围内癌症相关死亡的主要原因之一[3]. 尽管通过放化疗合并手术切除等手段可改进食管癌的治疗疗效，其预后仍不理想[4]. 因此，亟待充分了解食管癌发生发展的遗传和分子机制，发掘有效的食管癌的诊断和治疗手段. 长非编码RNA (lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸且缺失编码能力的RNA分子[5]，可通过表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等方式调控基因的表达水平. 研究表明lncRNA在许多生物过程中发挥重要作用，如细胞生长、分化、免疫反应等[6, 7]. MIR31HG是新发现的一种肿瘤相关lncRNA，其定位在人染色体9（9p21.3）[8]，已被发现在胃癌组织中低表达，且过表达MIR31HG能抑制胃癌细胞的增殖，抑制肿瘤的发展[9]. 此外，基因谱分析发现，MIR31HG在胰腺癌中高表达，且敲除MIR31HG可抑制胰腺癌细胞的生长[10]. MIR31HG被发现与食管癌的不良预后密切相关，但其在食管癌中的生物学功能仍未阐明[11]. 本研究检测了人ESCC组织和细胞系中MIR31HG的表达，探索了改变MIR31HG表达对ESCC细胞生长的影响及其可能机制，以期为诊断和治疗食管癌提供新策略. 1材料与方法 1. 1主要材料与试剂 12例健康人食管黏膜上皮组织（control）、21例食管癌组织以及癌旁组织均取自河南中医药大学第一附属医院消化肿瘤科，并与患者及家属签署知情同意书，且研究经过河南中医药大学伦理委员会审批通过. 人食管上皮传代细胞系Het-1A及食管癌细胞系Eca-109、EC-1与KYSE30均购自美国典型培养物保藏中心（ATCC）；RPMI1640培养基和胎牛血清购自Gibco公司；过表达质粒pcDNA3.1-MIR31HG