谷氨酸生产菌及扩大培养.pptVIP

第三节 谷氨酸生产菌的育种 4，选育细胞膜渗透性好的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 5，选育强化CO2固定反应的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 6，选育减弱乙醛酸循环的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 7，选育强化三羧酸循环中从柠檬酸到a-酮戊二酸代谢的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 8，选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反馈调节的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 9，选育强化能量代谢的突变株 第三节 谷氨酸生产菌的育种 10，选育减弱HMP途径后段酶活性的突变株 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 一、应用原生质体融合新技术选育谷氨酸生产菌 1)标记菌株的筛选； 2)原生质体的制备； 3)原生质体的再生； 4)原生质体的融合； 5)融合子的选择； 6)实用性菌株的筛选。 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 二，应用转化法选育谷氨酸生产菌 所谓转化，是指受体细胞直接吸收了来自供体细胞的DNA片段，并将它整合到自己的基因组中，从而获得了供体细胞部分遗传性状的现象。转化作用需要受体菌和转化DNA。转化既是进行细菌遗传分析的有效工具，亦是微生物育种的有效方法。 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 三，应用转导法选育谷氨酸生产菌 所谓转导，是指通过温和型噬菌体为媒介，将供体细脑中的DNA片段携带到受体细胞中，从而使受体细胞获得了供体细胞部分遗传性状的现象。转导作用需要三个组成部分，即供体菌，转导噬菌体，受体菌。由于绝大多数细菌(包括谷氨酸生产菌在内)都有噬菌体，所以转导远较转化作用普遍。又因为转导DNA位于噬菌体蛋白质外壳内，所以不会像转化DNA那样容易被外界的DNA分解酶所破坏，因此比较稳定。转导同转化一样，也是微生物育种的有效方法。 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 四、应用重组DNA技术选育谷氨酸生产菌 重组DNA技术也称为基因工程，它是在分子遗传学理论的基础上发展起来的。它综合了生物化学和微生物学的现代技术和手段在离体条件下将某种生物的基因与作为载体的DNA分子连接起来，然后转化到某一寄主细胞中，使之进行复制并得以表达，从而使寄主菌获得新的遗传性状。利用重组DNA技术，可以使编码限速酶的基因扩增以排除生物合成途径中的“瓶颈”，从而使谷氨酸产量增加。因比重组DNA技术是提高谷氨酸产量的一种新的有效手段。 第四节 利用生物工程新技术选育谷氨酸生产菌 五、应用固定化细胞技术发酵生产谷氨酸 固定化细胞是60年代后期发展起来的一项新技术，是通过物理的或化学的方法将细胞束缚在一定区间内使之仍具有催化活性的固定化生物催化剂。由于它既能保持酶或微生物细胞的催化功能，又能使细胞很方便地与反应液分离，并能进行重复使用，所以对原材料的合理利用，缩短不必要的操作时间，防止环境污染及进行现代化的工业生产部具有重要的现实意义。 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 在谷氨酸生产中，依其代谢途径，把不必要的代谢途径 (经诱变阻断了a一酮戊二酸到琥珀酰CoA和乙醛酸两条代谢途径) 切断后，同时诱变出细胞渗漏型甘油缺陷 B 4 ，以便让谷氨酸有效外漏，解除因代谢途径改变后细胞内代谢产物谷氨酸过度积累而产生的反馈抑制，谷氨酸产量有一定提高( 经诱变筛选得到的营养缺陷型突变株 B 4比其出发菌株 B l提高产酸率 18.6 ％ 和对糖的转化率提高 12.3 ％) 。 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.1 ，菌株和质粒 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.2 培养基和培养条件 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.2 培养基和培养条件 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 1.3 DNA的提取与纯化 1.4 PCR克隆pfkA基因 1.5 重组质粒Ku一1的构建及重组菌的筛选和鉴定 1.6 重组质粒的稳定性 1.7 磷酸果糖激酶活性测定 1.8 糖转化率和谷氨酸生成比较 举例：通过基因工程构建谷氨酸生产菌B44 结果： 经基因工程改造后的 B 4 4对糖的转化率有所提高，谷氨酸产量有较大的提高， 这主要是增大磷酸果糖激酶剂量，解除了EMP途径中的磷酸果糖激酶的限制， 以致解除了磷酸果糖激酶对已经改造的谷氨酸整个代谢途径的限制，故物流代谢增强。以致B44对糖的转化率有所提高，谷氨酸产量有较大的提高。 第五节 菌种的扩大培养和种子的质量要求 国内谷氨酸发酵种子扩大培养普遍采用二级种子培养的流程，即；斜面菌种----一级种子培养----二级种子培养----发酵罐。 第五节 菌种的扩大培养和种子的质量要求 一，菌种的扩大培养