羽毛肽螯合锰的鉴定及制备工艺研究.docVIP

羽毛肽螯合猛的鉴定及制备工艺研究 单春乔刘秋晨孙远芳韩雪冰宋蕙男王杲强S 鑫刘艳 大连三仪生物工程研究所瓦房店市动物卫生监督所 瓦房店市农业综合行政执法大队江苏三仪科研质量 控制中心 ： 试验以羽毛粉经角蛋白酶酶解制得的羽毛低聚肽水解液与水合氯化镒为原料， 合成羽毛低聚肽螯合猛，通过红外色谱法分析螯合物的状态，通过单因素试验 筛选和响应而试验优化合成工艺条件，结果表明，温度、质量比和pH值对螯合 率影响较大，羽毛低聚肽螯合镭的最佳制备条件为质量比1.2 ： k反应温度 65°C、反应p H值6.6和反应时间30 min,在此条件下，镭离子的螯合率为 9. 16%o 关键词： 羽毛低聚肽;螯合;反应条件; ：单春乔，硕士，中级工程师，研究方向为生化与分子生物学。 ：刘艳，博士，高级兽医师，研究方向为分子生物学和食品科学。 ：2017-10-23 Received： 2017-10-23 猛是生物机体内重要的阳离子，是调节细胞内外钙、钾和钠平衡的重要离子。猛 参与生物机体内所有的能量代谢，是ATP酶所必需的辅助因子，能催化或激活 300多种酶体系。机体缺锚会导致一系列牛理功能紊乱，如影响酶的代谢，改变 细胞膜的通透性，加速钠、钾和钙依赖泵能量的消耗，加快细胞内钙的贮存及导 致细胞坏死等。因此，在动物科学领域中镭具有很重要的生物学及营养学价值。 目前，在饲料生产和临床应用方面，猛制剂的添加大致有3种类型:无机猛、氨 基酸镭和有机酸镭盐。不同类型的镐制剂对动物机体的临床效果及生物学功能存 在显著差异[1-2] o国内外大量研究结果证实，有机镭制剂的应用效果远远高于 无机形式的镭制剂添加剂固。羽毛中的蛋白质含量较高，经特殊工艺处理的羽 毛粉可制备出利于动物体吸收利用的小肽，通过将具有多种牛理功能的多肽与 镒盐进行螯合，提高镒元素在机体的吸收和利用效率，研制岀具有双重营养功 能的饲料添加剂 多肽螯合猛饲料添加剂。关于混合蛋口肽和某些氨基酸与 金属盐螯合物的工艺条件有学者进行过报道，但对于羽毛低聚肽螯合猛的制备 方法未见报道。 1材料与方法 1.1试验材料 氢氧化钠、氯化镭和无水乙醇（分析纯）。 1.2螯合物中猛含量的测定 釆用EDTA络合滴定法￡11。 1. 3猛离子螯合率的测定 镒的螯合率二螯合的镒元素含量/总的镒元素含量XI00% 1.4羽毛低聚肽螯合猛的制备方法 量取一定浓度的羽毛低聚肽溶液，加入准确称量的氯化猛，待氯化猛充分溶解 后，用氢氧化钠和盐酸溶液调至相应反应所需的pH值，在固定温度下反应一段 时间。冷却后，用8倍体积的无水乙醇洗涤沉淀，抽滤，抽干后置于干燥箱 （60°C）屮烘干，得白色粉末。 1. 5螯合物红外色谱分析 按照FT-1R光谱表征（Bruker公司的Tensor-27红外光谱仪）将样品按质量分 数1 ： 30的比例与漠化钾充分混合，并进行研磨压片，以纯漠化钾片的谱图做 参比，在室温下扫描记录样品的谱图，扫描范围为400^4 000 cm,检测精度为4 cm,扫描次数为32次。 1. 6羽毛肽螯合猛离子最优条件响应面优化 响应而分析法（RSM）是以回归方程作为函数估算的工具，确定各因素及其交互 作用对试验指标的影响，能够精确地表述各因素和响应值之间的关系。根据 Box-Behnken的中心组合试验设计原理，选取质量比、反应p H值和反应温度为 响应面分析试验因素，分别以A、B和C表示，试验因素和水平设计见表1,使 用 Design-Expert 软件进行 BoxBchnkcn 设计。 2结果与讨论 2.1羽毛低聚肽螯合猛的红外分析结果 红外光谱法是研究螯合物的重要方法。从图1可见，大豆肽在1 662和1 556 cm 处岀现明显的振动峰，分别归属为酰胺键中C二0伸缩振动峰（酰胺I带）和N-H 的弯曲振动峰（酰胺II带）。镭与肽形成复合物后与大豆肽相比，除保留酰胺 键的振动峰外，红外光谱曲线也发生改变，主要表现在:螯合反应后红外光谱曲 线在3 072和1 451 cm处的特征吸收峰消失，这与文献屮制备猪血多肽铁螯合 物的研究表现出相似的趋势，因此可以断定该大豆肽与猛离子已形成猛肽螯合 物。 图1螯合物的红外谱图 2.2羽毛低聚肽与猛离子的质量比对螯合率的影响 反应条件:反应温度为55°C,反应时间30min, pH值为6.0。羽毛低聚肽与镐的 质量比对螯合反应的影响结果见图2。 图2质量比对螯合率的影响 从图2可见，质量比对螯合反应有重要影响，当配体质量比为1：1时，螯合率 达到最大。配体质量比太小时，形成的螯合物不稳定;配体质量比太高时，会造 成羽毛低聚肽残留，增加生产成本。 2.3反应p H值对羽毛低聚肽螯合猛离子反应螯合率的影响 反应条件:质量比为1 ： 1,反应温度为55°C,反应时间30