聚合酶链反应及其相关技术.pptVIP

聚合酶链反应极其相关技术 上海交通大学医学院附属瑞金医院 樊绮诗 聚合酶链反应于1983年由美国Cetus公司K. Mullis博士建立，并和定点突变的发明者M. Smith一起荣获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 一、PCR反应原理和反应过程 Amplification of DNA in vitro including: 变性（denaturation）: 94 ?C~95 ?C 退火（annealing）: 40 ?C~70 ?C 延伸（extension）: 72 ?C 三个步骤作为PCR的一个循环，每当完成一个循环，一个分子的模板被复制为二个，产物量以指数形式增长。 二、PCR的反应体系和反应条件 PCR反应体系 参与PCR反应的主要成份(principle components): Template、Primers、dNTP Taq DNA polymerase Buffer 模板(Template) 基因组DNA、RNA、质粒DNA、线粒体DNA等 RNA作为模板时，须先将RNA逆转录cDNA，再以 cDNA作为扩增的模板 模板量：1000ng、500ng、100ng、50ng? 引 物（Primers) 引物决定PCR扩增产物的特异性和长度，是化学合成的寡核苷酸片段。 化学合