生物制药工艺学第15章第三节重组DNA药物.pptVIP

第三节 重组DNA药物 一、重组DNA技术与基因工程的基本定义 优点： 1、可大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽；去除内源性物质的不足之处 2、提供足够数量的生理活性物质，以进行生理生化、结构的研究 3、利用基因工程技术可发现、挖掘更多内源性生理活性物质 4、获得新型化合物 主要基因工程产品的研制、开发、上市时间 DNA重组药物制造的主要步骤 二、基本过程 上游阶段： 实验室 获得目的基因、酶切和酶连、插入适当载体、转入宿主细胞、复制、目的基因分析确证、表达、筛选合适表达系统等 下游阶段：将实验室成果产业化 发酵参数确定、新型生物反应器研制、高效分离介质及装置开发、生物传感器设计制造、电子计算机优化控制、产品质量控制 注意：上游DNA重组的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想；而下游过程则是上游基因重组蓝图的体现和保证，这是基因工程产业化的基本原则。 1、目的基因的获得 1）、鸟枪法（基因文库） 基因组DNA提取→ 限制性内切酶部分水解→与载体连接→转化、扩增与筛选 2）、逆转录法（cDNA文库） mRNA纯化→cDNA第一合成→第二链合成→ cDNA克隆→将重组体导入宿主细胞→ cDNA文库鉴定→目的cDNA克隆的分离和鉴定 3）、合成法 4）、PCR法 4、PCR法或逆转录PCR（RT-PCR） 典型PCR反应包括 ①模板