常见血红蛋白电泳图谱及临床应用.pptVIP

血红蛋白电泳操作及常见血红蛋白电泳图谱 血红蛋白的结构 血红蛋白是由4条多肽链（2对）和4个可以结合铁和氧气的血红素组成 血红蛋白电泳的检测 一、原理：Hb中的珠蛋白和其他蛋白质一样为两性电解质，在不同的缓冲液中可带正或负电荷，在电场中向阴极或阳极移动，由于不同的蛋白质之间其等电点、分子大小、形态及所带电荷不同，其移动速率不同（电泳迁移率不同），在一定的支持介质中可借以分离。 二、仪器：Helena BioSciences SAS-3样本分析系统(英国海伦娜生物科学) 三、操作： （一）血红蛋白液的制取 1、取一份红细胞（或全血）加十份生理盐水洗涤，3000转/分钟离心5分钟，弃盐水 2、洗涤三次后，弃盐水 3、按压积红细胞体积加等体积蒸馏水，摇匀，再加1/2体积的四氯化碳震荡1-3分钟，3000转/分钟离心5分钟，吸取上层血红蛋白溶液（此浓度约为10%）待用 （二）仪器操作 1、开机 2、吸取30ul血红蛋白溶液加入样本盘 3、取两片点样刀锋放在自动加样器2，14号位，点样的时候把梳子从14号的位置跳至12号位置 4、电泳槽内加界面液（3100） 5、揭掉电泳片表面的保护膜，放入电泳片，避免气泡，擦掉四周多余液 6、用BLOTC吸去电泳片上多作的缓冲液 7、放好碳棒，盖好盖子，按下箭头选择“”为测试项目再按“START”进入程序再按“Enter”开始电泳，约18分钟，仪器示警，按“STOP”结束操作，打开盖子，铲掉盐桥 8、将电泳片放在染色架上，放入染色槽中，按下箭头选择“START”为测试项目约15分钟，仪器示警，表示已完成操作，按下“STOP”结束操作 9、拿出电泳片即可扫描 正常的血红蛋白电泳带 正常成人：HbA(α2β2): 94.5%-98.5% HbF(α2γ2): 1% HbA2(α2δ2): 2.5%-3.5% 正常新生儿：HbA(α2β2): 12%-40% HbF(α2γ2): 6%-93% HbA2(α2δ2):0.1%-1.0% 三、HbH病 四、Hb Bart’s胎儿水肿综合征 异常Hb病 常见有HbJ, HbK, HbG和HbD