- 1、本文档共40页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
体外分析技术 体外分析技术 利用放射分析或非放射分析技术测定生物样品中微量生物活性物质含量的一类分析法。 体外放射分析技术 放射性竞争结合分析:放射免疫分析(RIA) 放射性非竞争结合分析:免疫放射分析(IRMA) 受体放射配基结合分析(RBA) 体外非放射分析技术 化学发光分析 时间分辨荧光分析 酶免疫分析 放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA) 概念 是利用特异抗体与标记抗原和非标记抗原的竞争结合反应,通过测定复合物放射性来计算非标记抗原的量的一种超微量分析技术。 1959年Berson和Yalow 首先报导人体血浆内源性胰岛素的免疫分析。 1977年荣获诺贝尔奖。 原 理 基本原理是竞争结合反应 *Ag+Ab *AgAb+*Ag (free) + Ag AgAb + Ag (free) *Ag和Ag与Ab具有相同的结合能力,当Ab的量有限时,相互竞争,相互抑制。 Ag和*Ag与Ab结合的量取决于两者的浓度比。遵循质量作用定律。 *Ag与Ab的结合率随着Ag的量的增加而减少,呈负相关。反之亦然。 原理 将结合型B (Ag?Ab和*Ag?Ab)与游离型F (Ag和*Ag)分离开,分别测定其放射性,则B/F与Ka和待测Ag呈函数关系。 用已知的不同浓度的标准Ag与一定量的*Ag和Ab作用,即可测得在各种标准浓度下的B/F比值,以此绘成标准曲线。 根据被测Ag的B/F比值,就可在标准曲线上求出相应的该抗原的含量。 原理 Ag+Ab AgAb 反应达到平衡时 Ka= = K1为Ag与Ab结合速率常数 K2为Ag与Ab解离速率常数 Ka为平衡常数或亲和力常数 K1 K2 K1 K2 [Ag?Ab] [Ag][Ab] 数学模式 数学模式 若Ag0及Ab0分别代表抗原及抗体的初始浓度,则平衡时: [Ag]=[Ag0]-[Ag?Ab] [Ab]=[Ab0]-[Ag?Ab] B/F= [Ag?Ab]/[Ag] (B/F)2+(1+Ka[Ag0]-Ka[Ab0])B/F-Ka[Ag0]=0 Ka为常数, [Ab0]为固定值, Ag0=*Ag+Ag, *Ag为设定的量。 B/F与未标记Ag之间呈函数关系。 基本方法:主要试剂 特异抗体 高亲和力(affinity): Ag与Ab结合的能力。 高特异性(specificity): 不易发生交叉反应。 高滴度(titer):所需抗体量少,杂质干扰少。 标记抗原 1)与待测物同一物质; 2)生物活性不变; 3)核素半衰期长; 4)高比活度、放化纯度。 标准品(非标记抗原) 常用液相分离技术: 收集抗原抗体复合物(B) 双抗体沉淀法: 分离完全,非特异结合小,环境影响小,效价高,但 成本高. 聚乙二醇(PEG)沉淀法: 快速,价廉,来源方便,受环境影响大 葡萄球菌A蛋白(SPA)沉淀法 常用液相分离技术: 收集游离抗原(F) 活性炭吸附法: 吸附游离部分,适用于分离小分子游离抗原。 快速、简便、准确性差. 葡聚糖包被活性炭(DCC) 增强吸附和减少解离,常使用。 活性炭联结氧化铁制备DCC. 常用液相分离技术: 固相法 固相分离法 按材料(塑料、纤维素、凝胶颗粒)不同,有试管法、微粒法等。 固相分离法是RIA近年来发展较快的领域 试管固相法:抗体吸附在塑料试管上 吸附量小,重现性差等 微粒法和微球法:吸附量大等。 基本步骤 加样:系列反应管中加入相同剂量的* Ag、Ab,不同剂量标准Ag或一定量样品。 孵育:反应达到平衡所需孵育时间温度不同。 分离结合及游离部分: 测放射性:125I、3H 数据
您可能关注的文档
- [Maya火星课堂(第1版)].秦向阳.黑白.pdf
- [Maya火星课堂(第2版)-上].万建龙.pdf
- [Maya火星课堂(第2版)-下].万建龙.pdf
- 核医学-PETCT临床应用 - 张淼.ppt
- 核医学-脑显像17年.ppt
- 核医学-小动物PETCT 应用.ppt
- 核医学-心脏.大学生17年.ppt
- 核医学-肿瘤显像-8年制 2017.ppt
- catia_IMA模块_中文教程.pdf
- C++编程规范手册.pdf
- 2025年山东省高密市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验试卷参考答案.docx
- 2025年山东省莱西市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验知识点试题带答案.docx
- 2025年江苏省仪征市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验试卷完整版.docx
- 2025年江苏省扬中市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验知识点试题完整.docx
- 云南省文山市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验强化训练试题集及参考答案.docx
- 2025年辽宁省北票市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验强化训练试题集一套.docx
- 2025年山东省肥城市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验知识点试题完整版.docx
- 青海省德令哈市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验试卷附答案.docx
- 2025年四川省万源市职业能力倾向测验事业单位考试(中小学教师类D类)试题及参考答案1套.docx
- 陕西省兴平市事业单位考试(中小学教师类D类)职业能力倾向测验重点难点精练试题汇编.docx
最近下载
- 六年级数学《圆的对称性》C1跨学科学习活动设计学习活动方案学生成果及点评.pdf VIP
- 高低压变配电工程施工招标文件.pdf VIP
- 变电站施工合同协议书范本.docx
- 《分级护理制度》课件.ppt VIP
- 2024年检验类之临床医学检验技术(士)真题精选附答案 .pdf VIP
- J B∕T 13202.4-2017 -柴油机 颗粒捕集系统 第4部分:颗粒捕集器技术条件.pdf
- 2.蜗牛的坚持 课件(共19张PPT内嵌视频) 人教版一年级美术上册02.ppt.pptx VIP
- 软科2024年中国大学排名 .pdf VIP
- DB37_T 5174-2021 山东省沿海地区建筑工程风压标准.docx
- 小学跨学科教学的评价与反馈.docx
文档评论(0)