第十一章-表观遗传学.pptVIP

2006年10月2日，瑞典皇家卡罗林医学院宣布，本年度诺贝尔生理学和医学奖的桂冠授予两位美国人： A.Z. Fire （安德鲁·法尔） C.C. Mello （克雷格·梅洛） 他们获奖，是因为发现了RNA的干扰机制。 诺贝尔奖评委会的公报说， Fire 和 Mello 获奖是因为他们“发现了控制遗传信息流动的基本机制。” Fire 和 Mello (1998) 提出双链RNA（dsRNA ）可以作为调控元件而触发基因的沉寂 当时普遍认为反义RNA诱导的相关基因沉寂是通过与互补mRNA结合，从而阻碍蛋白质的合成。 Fire 和 Mello 的工作推翻了这一定论。 实验性细胞内引入RNA 以干扰内源性基因的功能。 当时一般认为这种 RNA 干扰依赖于引入的RNA与mRNA杂交，以反义链封闭mRNA的翻译。 设计实验拟解决：“RNA 干扰”是否与转入的RNA结构有关。 意外发现：导入双链RNA的产生功能干扰的有效性远高于导入单链RNA, sense or antisense RNA导入均如此。 仅需少数分子即可产生干扰效应，提示酶促反应或分子扩增的存在。 上述现象提示： 1. 存在超越简单反义RNA作用的机理。 2. RNA靶向的作用也不能排除。 3. 同时可能存在RNA与染色质的直接作用，影响RNA的转录。 miRNAs与siRNAs区别 分子起源： ?miRNAs来源于特异性前体，在基因组内具有明确的编码序列； ? siRNAs 可能更随机的来源于较长的dsRNAs ，它亦可由外源导入或内源基因的双向转录来源。 作用机制： ?多数情况下，miRNAs 与靶mRNA 3‘-UTRs 区多位点非精确的互补结合； ? siRNAs常与靶mRNA单个位点精确配对，导致靶mRNAs 裂解。 siRNAs和miRNAs 在分子特征，生物发生和发挥功能作用的机制均相似。 目前将两者割裂为两类分子，这更多体现了人为因素的存在，可能与它们的发现过程不同有关。 事实上，今天有关miRNAs 认知，其中许多来源于对siRNAs和 RNAi的认识途径。 几乎与第二种miRNA( let-7） 发现的同时, 通过不同的体系鉴定了small RNAs 和RNA干扰( RNA interference， RNAi)现象的存在。 RNAi 是一种进化上保守的序列特异性基因沉寂机制，通过导入双链RNA可以始动RNAi 的过程。 其细胞内的最后过程仍是将导入的dsRNA转化为21–25 bp大小的干涉RNA（small interfering RNAs, siRNAs) siRNA的一条链选择性的整合入发挥功能作用的复合体 (the RNA-induced silencing complex, RISC) 例：动脉粥样硬化 是一种局灶性增生性疾病，存在表遗传因素，平滑肌细胞增值可使血管变窄。 曾观察到年龄相关的基因（ERα）启动子区甲基化。 异常甲基化的细胞可使组织或器官呈现表观遗传上的异质性和镶嵌性。 这种年龄相关的表遗传镶嵌性可能是血管上皮细胞、平滑肌细胞局灶性病变的重要病因。 胰岛素抵抗性糖尿病：胰岛素受体信号传导相关系列基因的表观遗传异常。 表观遗传分析在医学中的潜在应用 表观基因组在发育、生长和衰老过程中存在一个动态变化过程，体细胞的表观基因组存在重新编程的可能性，这有助于将表观遗传分析应用于诊断、风险评估和治疗。 需要解决的问题： （1）确定表观遗传修饰与特定生理和病理指标的关系（抑癌基因启动子区甲基化）； （2）技术分析的可行性； （3）确定表观遗传修饰——病理指标——个体临床表现之间的关系 亚硫酸氢盐选择性地使胞嘧啶脱氨，但不作用于5-mC DNA 经亚硫酸氢盐处理后， 甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶 亚硫酸氢盐处理后DNA作为模板，加入甲基化特异性的引物（primerⅠ）或非甲基化的引物（primerⅡ），进行特异性的扩增 甲基特异性的PCR 扩增（MS-PCR）: 七、表观遗传的生物学意义 Jirtle和Waterland的实验（2003）：Agouti小鼠实验 Agouti（A）基因编码一种信号分子，合成黄色素。在鼠发育过程中一般短暂表达，鼠毛一段呈现黄色，使野生型Agouti鼠呈棕褐色。 在A基因上游插入一个IAP（intracisternal A particle，源自逆转座子LTR序列),使A基因受IAP中的启动子调控而持续表达，毛色呈黄色。插入了IAP的“A”基因称“AVY”(Agouti viable yellow gene allele) IAP启动子CpG岛的甲基化又会使有些细胞中的AVY 表达受抑。 胚胎发育早期的表观