精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的时相性抑制作用-生命科学研究.pdfVIP

第 18 卷 第 1 期 生 命 科 学 研 究 Ｖｏｌ．１8 Ｎｏ．1 ２０ 14 年 2 月 Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Feb. ２０ 14 精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性 的时相性抑制作用 冯崔香 ，邓丽 刚 ，闫 征 ，杜 国华 ，王 楠* （中国医学科学院 北京协和医学院药物研究所 新药作用机制研究与药效评价北京市重点实验室 ， 中国北京 100050 ） 摘 要 ：精氨 酸 常在 重组蛋 白的体 外复性 中，作 为一种 小分子 添加 剂 用 于抑 制蛋 白聚 集 。 精氨 酸对蛋 白复性折 叠过程 本 身的影 响 尚不 清楚 。 首 次 以不 易聚 集 的牛胰 核 糖 核 酸酶 为研 究对 象 ，通过 飞行 质谱 检 测氧化 复性 中 间体 的 变化 ，通过 酶 学活性检 测蛋 白活性 的恢 复过程 ，观 察 了精氨 酸对氧化 复性 的直接 影 响 。 发 现 不 同浓度精 氨 酸对 牛胰核 糖核 酸酶 的氧化 复性 有 直接 的抑 制作 用 。 特 别在 0.5 mol/L 浓度 时 ，精 氨 酸对 牛胰 核 糖 核 酸酶氧 化 复性 的抑 制作 用具 有独特 的 时相依 赖性 ：早 期 复性 可持 续 至 4 h ，其 活性 恢 复达 30%后 ，晚期 复性基 本 终止 。 这种 抑 制特征 与脲 的抑 制作 用有 明显 的不 同 ，精氨 酸没有 完全抑 制 关键 结构 中间体 的形成 。 结果说 明 ，牛胰核 糖核 酸酶 的氧化 复性 ，除 经 关键 结构 中间体 的主要 通路 外 ，还 可 能存 在 一 个 潜在 复性 通路 ，它是 其 氧化 复性后 期 的 关键 限速 通路 。 该 复性 通路 可 以被 0.5 mol/L 精氨 酸 完全 阻断 。 关键 词 ：精氨 酸 ；牛胰核 糖核 酸酶 ；氧化 复性 ；中间体 中图分 类 号 ： 文献标 识码 ： 文章编 号 （ ） Q7 1 A : 1007鄄7847 20 14 0 1鄄00 12鄄09 Phase-specific Inhibition of Arginine on the Oxidative Regeneration of Bovine Pancreatic Ribonuclease A FENG Cui-xiang, DENG Li-gang, YAN Zheng, DU Guo-hua, WANG Nan* (Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Institute of Materia Medica, Beij ing Key Laboratory of New Drug Mechanisms and Pharmacological Evaluation Study, Beij ing 100050, China) Abstract ：Arginine is often used as a small molecule additive to suppress the aggregation of recombinant proteins during regeneration in vitro.