细胞色素P450呼吸链.ppt

生 物 氧 化 参与生物氧化主要的酶 氧化酶（Oxidases） 脱氢酶（Dehydrogenases）最普遍 过氧化物酶（Peroxidases） 加氧酶（Oxygenase ） 呼 吸 链(Respiratory Chain) 定义——生物氧化过程中从代谢物脱下来的氢和电子需要经过一系列中间传递体，最后才与氧气形成水，在其间能量逐步释放。这种由一系列传递体构成的链状复合体称为电子传递体系或简称为呼吸链。 呼吸链的组分 NAD+及与NAD+偶联的脱氢酶 黄素及与黄素偶联的脱氢酶 辅酶Q：流动的电子传递体 铁硫蛋白 细胞色素：流动的电子传递体 氧气 如何确定呼吸链各组分的排列顺序 测定各成分的标准氧化还原电位（E0＇） 根据在有氧环境下氧化反应达到平衡时各电子传递体的还原程度来确定 使用特异性呼吸链抑制剂和人工电子受体 呼吸链的拆分和重组 氧化磷酸化 呼吸链的主要功能是产生能量货币ATP。当电子沿着呼吸链向下游传递的时候总伴随着自由能的释放，释放的自由能有很大一部分用来驱动ATP的合成，这种与电子传递偶联在一起的合成ATP方式（ADP被磷酸化）被称为氧化磷酸化。 氧化磷酸化的偶联机制 化学偶联假说 构象偶联假说 化学渗透学说 该学说由Peter Mitchell于1961年提出，其核心内容是电子在沿着呼吸链向下游传递的时候，释放的自由能转化为跨线粒体内膜（或跨细菌质膜）的质子梯度，质子梯度中蕴藏的电化学势能直接用来驱动ATP的合成。驱动ATP合成的质子梯度通常被称为质子驱动力（pmf），它由化学势能（质子的浓度差）和电势能（内负外正）两部分组成。 支持化学渗透学说的主要的证据 （1）氧化磷酸化的进行需要完整的线粒体内膜的存在。 （2）使用精确的pH计可以检测到跨线粒体内膜的质子梯度存在。据测定，一个呼吸活跃的线粒体的膜间隙的pH要比其基质的pH低0.75个单位。 （3）破坏质子驱动力的化学试剂能够抑制ATP的合成。 （4）从线粒体内膜纯化得到一种酶能够直接利用质子梯度合成ATP，此酶称为F1F0-ATP合酶。 （5）人工建立的跨线粒体内膜的质子梯度也可驱动ATP的合成 F1/F0 ATP合酶的结构和功能 质子通过这种蛋白质的扩散驱动ATP合成和释放 两个部分: F1和F0 （后者因为受寡霉素的抑制而得名） F1 催化单元——由5种亚基组成 a3b3gde. Fo 膜整合单元——质子通道 ab2c10 结合变化学说 1977年Paul D. Boyer提出的结合变化学说能正确地解释F1F0-ATP合酶的作用机理。其主要内容是： （1）活性中心ATP的合成并不需要质子驱动力，与活性中心结合的ATP或ADP处于平衡。 （2）如果没有质子流过F0，与活性中心结合的ATP就不会与酶解离。 （3）3个β亚基与γ亚基的不同表面结合，于是不同的β亚基采取不同的构象。 （4）在某一时刻，1个β亚基为T态，1个β亚基为L态，1个β亚基为O态。 （5）处于T态的β亚基紧密结合1分子ATP，ATP与ADP＋Pi处于平衡，但ATP并不能与它解离；处于L态的β亚基结合有ADP和Pi，但并不能释放核苷酸；处于O态的β亚基能够释放结合的ATP。 （6）三种状态的β亚基可以相互转变，转变由γ亚基的转动所驱动。 （7）γ亚基转动的动力来自质子通过F0的流动。 结合变化学说可简化为：质子流动→驱动C单位转动→带动γ亚基转动→诱导β亚基构象变化→ATP释放和重新合成。 氧化磷酸化的解偶联 氧化磷酸化与呼吸链通常紧密偶联，但是，低水平的质子泄漏时刻发生在线粒体内膜上，因此，确切地说，线粒体通常是部分解偶联的。 解偶联一般是受解偶联剂作用所致。 解偶联剂的作用机制在于它们能够快速地消耗跨膜的质子梯度，使得质子难以通过F1F0-ATP合酶上的质子通道来合成ATP，从而将贮存在质子梯度之中的电化学势能转变成热。此外，随着质子梯度的消失，电子在呼吸链上“回流”压力将会减轻，进而导致细胞内脂肪等物质的生物氧化更加旺盛。 有两类解偶联剂，一类为有机小分子化合物，通常为脂溶性的质子载体，带有酸性基团；另一类为天然的解偶联蛋白（UCP） 。 解偶联蛋白 至少已发现五种类型的UCP—UCP1~UCP5。 原理：在线粒体内膜上形成质子通道。 UCP1 又名产热素，它主要存在于动物的褐色脂肪组织，与机体的非颤抖性产热有关。机体对寒冷做出的反应是交感神经末梢释放去甲肾上腺素，去甲肾上腺素激活褐色脂肪组织中的脂肪酶，脂肪酶水解脂肪，释放出游离的脂肪酸。游离脂肪酸不仅作为代谢燃料经氧化产生ATP和质子梯度，还能与CoQH2和嘌呤核苷酸一起直接激活产热素