试验九动物细胞培养.pptVIP

实验九 动物细胞培养 一、实验目的 掌握无菌操作； 掌握原代和传代细胞培养； 了解培养成纤维细胞的形态。 二、实验原理 原代培养 ：培养直接来自动物机体的细胞群，将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶称为传代或传代培养。 细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖。 三、实验器材与试剂 1. 器具 显微镜、电热恒温水浴锅、天平、CO2培养箱、蒸汽灭菌器、超净工作台、解剖刀、 眼科剪、眼科镊、培养皿 、锥形瓶、容量瓶、纱布、培养瓶、移液枪。 2. 材料 9 - 12 日龄发育良好的鸭胚。 3. 主要试剂 双蒸水、Hank’s液、0.25%胰蛋白酶、EDTA、NaHCO3 、台盼蓝、洋红。 营养液：DMEM培养基（含8%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。 维持液： DMEM培养基（含5%小牛血清、1万单位/ml青、链霉素）。 四、原代培养 1.酒精棉球消毒鸭蛋，剥出鸭胚，去头、翅、爪和内脏， 加Hank’s 液，剪碎为0. 5 -1mm3 的小块， Hank’s 液洗涤2 - 3 次。 2. 组织块移入培养瓶，间距0.5cm摆放后倒置培养瓶，加少量营养液，保持湿润，37 ℃培养，2hr后翻转培养瓶，添营养液继续培养。 3. 定期观察细胞贴壁生长状况，如颜色变黄，说明细胞生长，3-5天后更换培养液。 4 .倒置显微镜下观察拍照。 5.单层细胞用Hank’s 液洗涤后，加入维持液，用于原代细胞维持。 五、传代培养 当培养细胞接近汇合成片时，倾去培养液。 加入0. 25 %（含0. 02 %EDTA ）消化2-3分钟，倾去大部分消化液，留少量消化液浸润细胞。发现细胞层出现裂痕或空洞后，加入Hank’s 液洗去残留消化液，终止消化。 加适量营养液吹打分散，补加营养液后，1：2分装培养。 汇合后挑取少许细胞，染色，观察拍照。 原代培养的绍鸭成纤维细胞，相差显微镜照片 六、作业 1. 细胞培养过程中应该注意哪些事项？ 2. 描绘培养成纤维细胞的形态（或提供照片）。 * 正常细胞 凋亡细胞 分裂中期细胞 传代培养的绍鸭成纤维细胞形态（DAPI染色） * * *