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DNA的分离、提取和纯化技术 ;DNA的理化性质及特点; 核酸既含有酸性的基团，又含有弱碱性的基团，故可发生两性解离。其解离状态随溶液的pH值而改变。; 嘌呤和嘧啶具有共轭双键，能强烈吸收紫外光。在紫外区260nm和280nm处有强的吸收峰 。在260nm紫外线下，1OD（光密度值）相当于双链DNA浓度为50μg/ml；单链DNA为40μg/ml。因此可根据核酸溶液的OD值，计算核酸样品的浓度或含量。对于纯的DNA，可以通过A260/ A280值来判断其纯度。;DNA的特点; DNA提取的方案：应根据具体生物材料和待提取的核酸分子的特点而定。不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，基因组DNA的提取方法也有差异。
在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。
;DNA提取、纯化的方法; 试剂盒提取DNA
实验原理：
试剂盒提取DNA的基本原理是用细胞裂解液CL、缓冲液FG和蛋白酶K，破坏、消化细胞，用异丙醇和乙醇沉淀DNA，最后收获DNA。
;试剂盒提取DNA的基本步骤;所用器械与设备;1.磷酸盐缓冲液（PBS）：用于漂洗样本
2.细胞裂解液CL：裂解细胞、破坏细胞
3.蛋白酶K与缓冲液FG：消化细胞、缓冲溶液pH值、抑制DNA聚
合酶活性、破坏降解RNA
4.异丙醇：沉淀DNA
5.70%乙醇：漂洗DNA
6.缓冲液TE：溶解DNA;样品前处理;（1）若不能马上进行DNA提取，可将样本封存贮存于－20℃冰箱
中。
（2）研磨均匀，没有团块
（3）离心时注意配平
; DNA提取步骤; 2．缓冲液FG与蛋白酶K
向样品中加入缓冲液FG与蛋白酶K的混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块，混匀非常重要，充分的混匀有利于将蛋白质等大分子物质与蛋白酶K接触。
; 3．水浴 65度水浴10min，其间颠倒数次。;残液; 7.样品测定
在260nm紫外线下：
1OD＝50μg/ml（双链DNA）
1OD＝40μg/ml（单链DNA或RNA）
根据A260/A280比值，可判断所提取核酸（DNA）的纯度:DNA纯度比较理想的比值是1.8。
提取的DNA溶液的A260/A280比值高于1.8，说明有RNA的污染；低于1.8或1.75，则认为是蛋白质或酚污染。
; 本方法的注意事项：
1）缓冲液FG与蛋白酶K现用现配，加入到样本以
后立即涡旋
2）乙醇的残留会影响后续的反应（酶切、PCR等）
3）过分干燥DNA沉淀会影响DNA的溶解;核酸提取的原则:
1.保证核酸一级结构的完整性。
2.排除其他分子的污染，即纯度要高。
核酸纯化应达到的要求：
1.核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
2.其它生物大分子的污染应降低到最低程度；
3.排除其它核酸分子的污染。
;注意事项 ;
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;
;谢谢
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