高效转染试剂盒操作说明书.pdfVIP

中国试剂网 1 磷酸钙法高效转染试剂盒 （HET） 产品简介 Ø 百恩维公司生产研发的高效转染试剂盒（HET）可有效地转染各种哺乳动物细胞，通常 293 细胞转染率很容易达到40-50%，优化条件后更能高达90% 以上。并且对细胞基本没有毒 性。不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定细胞株。 Ø 质粒DNA, DNA, siRNA 等均可使用。 Ø 可用于转染的细胞包括各种细胞株（如 HEK293，NIH3T3，COS7 等）和原代细胞（如成 纤维细胞，成肌细胞，间充质干细胞，角质细胞，内皮细胞，上皮细胞等）。 Ø 转染前以细胞融合度不超过 80%为宜。接种密度因所采用的细胞系和细胞的倍增时间而 有所不同。一般而言，细胞的接种密度为 3 ～5 × 106 cells/100-mm 培养皿，1～2×106 cells/60-mm 培养皿或6 孔板中为6～8 ×105 cells/孔。 Ø 本试剂盒可转染六孔板细胞1000 次，每孔成本5 毛钱，性价比非常高。 Ø 本试剂盒提供的试剂都经无菌处理，并通过严格质量检验，可以直接使用。 保存条件 本试剂盒可在室温（15～25℃）保存三个月，4 ℃保存一年，-20℃保存一年以上。 包装清单 产品名称 包装 Buffer A 50ml Buffer B 5ml 标准操作步骤 1. 使用前预热试剂至常温。 2. 转染前一天，接种适量细胞悬液至100-mm 培养皿、60-mm 培养皿或6 孔板中，放置 到潮湿37°C 5% CO2 培养箱培养过夜。 3. 次日，吸去细胞培养液，加入新鲜培养液（不含青霉素-链霉素）。 4. 取两根无菌1.5ml eppendorf 管，分别记为A 、B。按下表，根据培养皿不同而加入不 同体积的试剂： 100-mm 培养皿 60-mm 培养皿 6 孔板 （含5ml 培养基） （含2.5ml 培养基） （含1ml 培养基） A 管：500μl Buffer A A 管：250μl Buffer A A 管：50μl Buffer A B 管：50μl Buffer B B 管：25μl Buffer B B 管：5μl Buffer B 10~100μg DNA 5～50μg DNA 1～10μg DNA 无菌水补足体系至500μl 无菌水补足体系至250μl 无菌水补足体系至50μl 5. 用移液管混匀B 管中溶液并将B 管中溶液轻轻逐滴加入到A 管中。用气泡法混匀转染 混合物，这一步尽量在2 分钟内完成，室温孵育30 分钟。 6. 将混合物逐滴加入到细胞中，轻轻摇晃培养皿使混合物均匀分布在细胞表面。 7. 放置到潮湿37°C、5%CO2 培养箱中培养过夜。 8. 次日早上用新鲜培养基更换细胞培养液，于37℃ 5%CO2 培养箱中继续培养24-48h 。 9. 检验转染效率（如荧光观察，蛋白质印迹等）。 注意事项： 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280 大于1.8，并且电泳检 测抽提到的质粒90% 以上都是超螺旋。 转染时，B 管中溶液轻轻逐滴加入到A 管中，请勿混乱顺序。 溶液的 pH 值关系到转染效率，尽量避免把转染试剂盒的溶液长时间暴露在空气中， 以免被空气中的二氧化碳酸化。 转染时由于质粒不同、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 订购信息 产品名称