从环境中分离酵母菌实验设计案.docVIP

实验设计方案 从环境中分离酵母菌 班级：10级生科（2）班 组员:刘楠楠: 201008010222 潘婷: 201008010225 李炜昊：201008010221 马森:201008010224 实验：从环境中分离出酵母菌 实验设计方案 采样 采样的理由： 酵母菌与人类的关系密切 酵母菌是一类单细胞真菌的俗称，分类学上分属于子囊菌纲 半知菌类 特征:1.?? 个体一般以单细胞状态存在；2.???多数营出芽生殖，有的裂殖；3.???能发酵糖类产能；4.???细胞壁常含有甘露聚糖；5.?? 喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。 酵母菌分布：主要生长在偏酸的含糖环境中，在水果、蜜饯的表面和果园土壤中最为常见。 种类：据1982年的资料，已知的酵母有56属，500多种。酵 母菌与人类的关系极其密切。千百年来，人类几乎天天离不开酵母菌，例如酒类的生产，面包的制作，乙醇和甘油发酵，石油及油品的脱蜡，饲用、药用等的生产。 酵母菌细胞的形态和构造 电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图 细胞直径比细菌粗10倍左右，如Saccharomyces cerevisiae细胞的宽度为2.5~10μm，长度为4.5~21μm。因此在光学显微镜下可以模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。酵母菌细胞的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。 细胞壁：酵母细胞壁呈“三明治”结构 外层：甘露聚糖（约占30%，以α-糖苷键联结（并非所有酵母菌都有） 内层：葡聚糖（约占30-40%，由D-葡萄糖以β-糖苷键联结） 中间层：蛋白质（含6-8%，多为酶类） 细胞膜： 酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类（甾醇）、VitD的前体----麦角固醇，这在原核生物是罕见的。 细胞核: 核膜： 核孔40～70nm ，透性比任何生物膜都大。 染色体:由DNA和组蛋白牢固结合而成，呈线状, 数目因种而异。 核仁：核内有一或几个区域rRNA含量很高，这一区域为核仁，是合成核糖体的场所。 中心体: 在核膜外，由蛋白质亚基组成的细丝 状结构，在细胞繁殖分裂中起作用。 细胞核的功能:携带遗传信息，控制细胞的增殖和代谢。 酵母菌的繁殖方式 4.酵母菌的菌落 大而厚，圆形，光滑湿润，粘性，颜色单调。常见白色、土黄色、红色。 采样的方法： 原理：大多数酵母菌为腐生，其生活最适pH为4.5一6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。故可以从甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮上取样。利用酵母菌喜欢酸性环境的特点，常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液（这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长） 实验材料和用具 1、 苹果果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。 2、豆芽汁葡萄糖培养基 原料：黄豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、 蒸馏水（1000ml），自然PH 配制方法： 陈新鲜豆芽100克，放入烧杯中，加水1000ml,煮沸约30min，用纱布过滤，用水补足原量，再加入葡萄糖50克，煮沸融化，121℃ 实验步骤 l、接种：取一小块果皮，不需冲洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培养液试管中，置28一30℃，培养24小时 2、培养，用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml，注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，置28一30℃ 3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中，混匀后加盖玻片制成水浸片，先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。 4、活酵母菌可使美蓝还原，从而使菌体不着色，用此方法可判断酵母菌的死活。 芽殖过程： 母细胞形成小突起（A—D） 核裂（E—G） 原生质分配（H—I） 新膜形成（J—K） 形成新细胞壁（L） 二、分离 原理：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。用划线法分离酵母菌培养液，从而得到单个菌落。挑取单个菌落反复再次划线分离纯化，最终可获得纯培养。 培养基的设计：马铃薯葡萄糖琼脂培养基： 原料：马铃薯（200克）、葡萄糖（20克）、琼脂（15-20克）、蒸馏水（1000ml），自然PH 配制方法： 将马铃薯去皮后，切片，加水煮烂（煮沸20—30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用4层纱布过滤，再加入糖和琼脂，加热融化后再补足水分至1000ml,并在121摄氏度条件下高压灭菌20分种。 方法:平板划线法 鉴定 原理：大多数酵母菌的菌落特征与细菌