器官培养 器官培养.pptVIP

第3章 器官培养 本章教学目的与要求 (1)一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择； (2)掌握茎尖培养的种类和操作步骤； (3)掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整； (4)掌握离体叶片的培养步骤； (5)一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。 器官培养的定义： 第一节 根的培养 根培养的意义: 1) 是进行根系生理研究的最优良实验体系; 2) 是研究器官分化、形态建成的良好体系； 3）可建立快速生长的根无性系。 一、离体根的培养方法： 1、培养无菌苗 2、切取1.0cm的根尖 3、接种在White培养基或1/2MS培养基中暗培养 4、一周后，取侧根扩大培养，可得到离体根的无性系 培养条件为暗光和25-27℃ 一、离体根的培养方法： 培养条件为暗光和25-27℃ 植株再生 根段的离体培养也可以用来再生植株。第一步诱导形成愈伤组织。第二步在再分化培养基上诱导芽的分化、在愈伤组织上分化成小植株 二、培养基： 无机离子较低的White培养基 或者2/3或1/2的MS、B5培养基 三、影响离体根生长的因素 第二节 茎尖的培养 一、含义及意义 1、类型 茎尖分生组织培养：对长度0.1mm左右，含1-2个叶原基的茎尖进行培养，目的是获得无病毒植株 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是快速繁殖。 2、茎尖培养的意义 无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究。 二、茎尖培养的一般方法 茎尖培养步骤 一般方法 茎尖培养步骤 (1)取材 挑选杂菌污染少，生长不久的茎尖。木本植物可在取材前对茎尖喷几次灭菌药剂。以保证材料不带或少带菌。用于普通茎尖培养，可先从植物的茎、藤或匍匐枝上切取2cra以上的顶梢。 (2)消毒接种 将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长，并将其大叶除去，休眠芽预先剥除鳞片。 将茎尖置于流水冲洗2-4h，再在95％的酒精中处理30s，然后在稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min，最后用无菌水冲洗数次，准备接种。 (3)接种 为了减少污染，可在接种前再剥掉一些叶片，使茎尖为0．5cm左右大小。这样取茎尖大小只能作为快速繁殖。有些植物的茎尖由于多酚氧化酶的氧化作用而变褐。所以在接种时，不能用生锈的解剖刀，动作要敏捷，随切随接，减少伤口在空气中暴露的时间，也可配制1％-5％Vc液，将切下的茎尖材料浸入处理一下。 二、茎尖培养的一般方法 (一) 制备外植体取1-2cm的枝条顶梢，去小叶---消毒---解剖镜下用解剖刀除去幼叶和叶原基，露出生长点，切下0.1-0.2mm长的茎尖(含1-2个叶原基) (二)培养基 (三)培养方法 (二)培养基 多数采用MS 培养基中生长素是必须的，如2,4-D，IAA， NAA等，但浓度不能太高，一般用0．1mg／L左右，高于此浓度，往往产生畸变芽或形成愈伤组织 不同植物对生长素的反应是不同的。 (三)培养方法 1、固体培养法：试管培养 2、纸桥培养法 2、纸桥培养法 含义：用酒杯状的滤纸代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进行培养。 三、茎尖分生组织培养与脱毒 四、普通茎尖培养与繁殖技术 概念：快速繁殖(微繁殖):用组织培养的方法，使植物的部分器官、组织迅速扩大培养，并移植到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工；节约空间有利于植物的工厂化生产；在无菌条件下进行，不受病虫害侵害。 （一）茎尖微繁技术的过程：分5个阶段 1、无菌培养体系的建立、 2、芽的增殖 3、中间繁殖体的增殖 4、诱导生根 5、试管苗的移植 1、无菌培养体系的建立 2、芽的增殖（1）顶芽和腋芽的发育 顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的丛生苗结构。 丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的嫩茎。这种繁殖方式称作微型扦插或无菌短枝扦插 优点：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保持原品种的特性。 （2）不定芽的发育 不定芽产生的途径： 外植体上直接产生 由外植体诱导的愈伤组织上产生。 3、中间繁殖体的增殖 茎的培养发育方向 4、壮苗和生根 壮苗目的：使增殖的嫩枝生根产生小植 株，以便移栽。 用White、1/2或1/3MS、B5等生根培养基。 降低N，P，K盐的量。 适当加大生长素（如NAA），不用或少用细胞分裂素，或在无激素的培养基上生根。 蔗糖降低到1.0-1.5%，以增强植株自养能力； 加入1%左右的活性炭； 增加光强度，以提高小植株的光合能力。 5、移栽 生根培养1个月左右。移植时可根据生根情况来进行。若发现新梢基部生有较浓密的不定根，长度在lcm以内，就可移栽人土。移栽时通过几天的炼苗过程，栽入塑料营