布鲁氏菌病实验室诊断技术.pptVIP

L/O/G/O 布鲁氏菌病实验室诊断技术 概 述 布氏菌（Brucella）是一个重要的人兽 共患病病原菌，该菌侵入人或动物后可引起 人兽共患的传染—变态反应性疾病，即布氏 菌病（Brucellosis，简称布病），是我国规 定报告的乙类传染病。布病存在于全球200多 个国家和地区，是全球特别是发展中国家面 临的重要的公共卫生问题。 实 验 室 检 查 病原学检查：病原的分离是确 诊布病最可靠的方法 病原学检查包括布氏菌的分离 培养（血培养、骨髓培养）、鉴定 特异性血清学诊断技术 平板凝集试验 虎红平板凝集试验 试管凝集试验 补体结合试验 抗球蛋白试验 含巯基化合物处理血清后凝集试验 虎红平板凝集试验 虎红平板凝集试验(RBPT)中所用的抗原是 酸化性（PH=3.6~3.9）带色抗原，与被检血 清作用时能抑制血清中IgM类抗体凝集活性 检查出的抗体是IgG类。 虎红平板凝集试验 1 检验目的、对该病的诊断意义 采用虎红平板凝集试验（RBPT）试验主要目的是排除某些非特异性凝集及某些其它细菌共同抗原与抗布氏菌血清出现的交叉反应，是一种快速、简便而有效的实验。该法多用于大规模筛选。 2 样品（标本）采集要求及采样量 用灭菌注射器无菌操作采取静脉血5ml置于无菌一次性采血管内，置斜面，分离血清。 虎红平板凝集试验 3 所需试剂、仪器设备、试验环境条件 清洁脱脂玻片或凹形孔的玻片、1ml吸管或微量加样器、微型玻璃搅棒（可用牙签替代）、虎红平板凝集抗原、被检血清。 4 操作步骤 在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，摇匀或用玻璃搅棒混匀，在5min内判定结果。 虎红平板凝集试验 5 质量控制 所用器材洁净，试剂标准，并在有效期内使用，所加剂量必须准确。血清标本不得发生溶血 6 结果判定 在5min内出现可见的凝集现象为阳性反应无凝集现象出现为阴性。 7 工作时限要求 个案病例，送检材料2日内完成，大批量样本不得超过7日。如全血不能及时分离血清，可冷藏4°C保存，但保存期不得超过3日。血清可冷冻保存，保存期不得超过2月。 虎红平板凝集试验 优点 简便、快速、易掌握，敏感性较好 可作为筛查试验；经济、方便 观察结果需在自然光状态下 试管凝集试验 试管凝集试验（SAT）的应用已有近百年历史，国内外成功地应用到人、畜间布鲁氏菌病的诊断上。实践证明该试验时一种简便异形，有一定特异性和敏感性的布病诊断方法。凝集试验的阳性反应多数出现在病后1-2周，间隔1-4周后抗体效价增高4倍及以上时，提示为近期感染。 试管凝集试验 SAT是一种特异、较敏感、稳定的检测方 法，可以检测人、畜血清中的抗布鲁氏菌 IgG、IgM、IgA 3类免疫球蛋白，且SAT检测 IgM的敏感性较高，因此可作为布鲁氏菌病的 早期诊断，同时又可用于布鲁氏菌病疫苗免疫 后血清抗体的检测。 SAT试验操作简便，判定容易，因此有广 阔的应用前景。 试管凝集试验 样品（标本）采集要求及采样量 用灭菌注射器无菌操作抽取静脉血5ml、3000转/分离心15min分离血清备检 器材及试剂 试管凝集抗原、被检血清、阳性血清、 稀释液（0.9%生理盐水） 1ml、 10ml 吸管、试管架、37 ℃温箱、离心机等 试管凝集试验 标准比浊管配置 SAT 阳性对照 血清 被检血清 样本 抗原的 稀释 试管凝集试验 抗原的稀释：将试管凝集抗原充分混匀后， 用0.9%生理盐水做10倍稀释，备用。 标准比浊管的制备：为了判定结果准确，应 制备凝集反应标准比浊管，作为判定透明程 度的依据，其配制方法如下：取凝集反应稀 释后的抗原液再作对倍稀释，即2ml稀释抗原 再加2ml盐水，混合后按下表配制。 管号 抗原稀释液（ml） 生理盐水 （ml） 透明度 标记 1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++ 4 0.75 0.25 25% ＋ 5 1.00 0.00 0% － 试管凝集反应标准比浊管配制 “++++”液体完全透明，菌体呈伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集； “+++” 液体近于完全透明，菌体呈伞状沉淀，呈75%凝集； “++” 液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集； “+” 液体不透明，管底有不很明显的伞状沉