反相离子对色谱法及其应用.pdf

文献综述 反相离子对色谱法及其应用 邹汉法 张玉奎 卢佩章 （中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心，大连，116012） 由于反相离子对色谱采用目前使用最为广泛的 除了在流动相中加入适量的离子对试剂外，其它条 反相高效液相色谱柱，在一般的通用型高效液相色 件与反相色谱法完全相同。在实际操作中影响离子 谱仪上，一次运行可同时分离分析离子型和中性化 性质样品保留值大小的因素主要有[5-7]1固定相 合物，分析速度快，效率高且操作简便，因此近年来 的键合量和碳链长度，2）离子对试剂的疏水作用力 越来越受到人们的重视。 强弱、电荷数和在流动相中的浓度，3流动相的酸 早期的反相离子对色谱是将固定液涂渍在担体 度，（4）流动相中强组分的性质和浓度，5流动相中 上作为固定相的分配色谱法[。自高效液相色谱法 的离子强度。在一个选定的反相色谱柱系统中，选择 用微粒硅胶键合相问世后，反相离子对色谱则多以 合适的离子对试剂是进行分离的首要条件。表1列 C8或C18键合相作为固定相，用含有离子对试剂的有 出的是常用离子对试剂类型和主要应用对象。一般 机溶剂-水溶液作为流动相[2-4]。反相离子对色谱法 来说，所选用的离子对试剂的电荷应与被分离的样 兼有反相色谱和离子色谱共同的优点，因此在药物 品的电荷相反，如对于酸性或带负电荷的溶质，多用 分析、生化样品分析、染料及其中间体等领域获得了 带正电荷的季胺盐作为离子对试剂，而对碱性或带 日益广泛的应用。 正电荷溶质，多用烷基磺酸盐（或硫酸盐）作为离子 由于反相离子色谱法中使用了离子对试剂和无 对试剂，这是两类最常用的离子对试剂。表2列出的 机盐，因此在操作上要注意以下几个方面：1改变 是对一些样品选择流动相pH值的基本原则。由于反 冲洗剂浓度或梯度冲洗操作后，柱系统的冲洗时间 相离子对色谱大多都用烷基键合固定相，所以流动 要长些，以保证柱内平衡；2）实验停止后须用纯水 相的pH值应控制在28.0范围内，以防止硅胶基 或甲醇／水冲洗进样阀、高压泵及色谱柱，以防流动 质的溶解。反相离子对色谱法对键合固定相的要求 相腐蚀设备和担体；3）一经发现离子对试剂在柱内 是尽可能选用烷基复盖度高的填料（如C18C8，而短 产生了不可逆吸附，则须用甲醇冲洗柱子。 链烷基键合固定相的稳定性较差。为了防止盐析现 象，流动相缓冲液中的盐浓度不宜太高，一般在10～ 反相离子对色谱的性质和分离机理 20mmol/L范围内。 由于反相离子对色谱是在反相系统中实现的， 表1 反相离子对色谱用离子对试剂的选择 表2 反相离子对色谱冲洗剂pH值选择 关于离子对色谱法的保留机理，目前有三种模 图。从图1中可以看到随着冲洗剂有机溶剂浓度的 型或理论来解释所观察到的现象和结果：其一是离 增大，k迅速减小，这是因为强组分浓度增加，使得流 子对模型[9-12]其二是动态离子交换模型[-4，最 动相与有机离子的非静电作用力增大，同时使在固 后是离子作用机理[5-17] 定相表面的离子对试剂的吸附量减小。这两个变化 根据离子对模型，认为样品离子在吸附剂表面 都促使保留值减小。从图2中可以看到，在离子对试 吸附之前先在流动相中与离子对试剂形成中性的离 剂浓度较低时，随着Cp的增加，溶质的k