第二章 菌种的选育、保藏和复壮.pptVIP

第二章 菌种的选育、保藏和复壮 菌种的选育包括选种和育种两方面的内容 选种：是根据微生物的特性，采用各种分离筛选方法,从自然界中或从生产实践中选出适合人们要求的菌种。 如：从噬菌体的发酵液中筛选抗噬菌体菌株 育种：是根据微生物遗传变异的原理，在已有的菌种基础上，采用诱变或杂交的方法，迫使菌种发生变异，然后在变异的菌株中挑选出符合生产实际要求的菌种。 一、自然选育 新种分离与筛选的步骤： 1、定方案：查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 2、采样：有针对性地采集样品。 3、增殖培养：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 4、纯种分离：利用分离技术得到纯种。 5、性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 根据目的到最合适的地方去。 要筛选分解纤维素的菌种，应采集富有腐烂纤维素的样品；要筛选能分解石油的微生物，应到油田或炼油厂去采集样品。 土壤是微生物的大本营，种类多，数量大，因而是最常采集样品的地方。采土的时候，以下几点值得注意： （1）土壤肥瘦：有机质较多的土壤含M也多。肥土细菌多。园林土、农田土放线菌为好。分离真菌，采集富有植物残体的土样较为合适。 （2）采土深度：表层干燥，M较少。5-20cm处较好。 （3）采土季节：以春秋二季为宜。 （4）采土方法：选择地点－→用小铲子除去表面－→取5－20cm处的土壤几十克－→放入事先灭过菌的纸袋内。 同时记录采土时间、地点、植被等情况以备查考。采土的点可多些，采土后要尽快分离。 2、增殖培养 原因：采集到的样品，可能含有我们所需要的微生物，但往往数量较少，而且杂菌混生，因而不易直接分离纯化，需要增殖培养。 方法：往样品中加入适合某些微生物生长繁殖的物质,或创造适合某些微生物生长繁殖的环境条件,这样就促进了某些微生物的大量繁殖。 举例： 1）往土样中加入一些石油，能利用石油的微生物容易生长繁殖； 2）把土样加入到含糖浓度高的培养基中，并把pH值调到4以下，就可使酵母菌得到增殖。 3）要筛选芽孢杆菌，先将样品加水后于80℃处理10分钟，非芽孢菌迅速死亡，使芽孢杆菌的浓度得到提高。 3、纯　种　分　离 将增殖培养效果显著的优势菌种（混杂生长的微生物）。进—步控制增殖培养的选择性条件，采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落 4、性能测定 1）粗测(初筛):起定性的作用，一般在培养皿上进行 例如：要测定某菌是否产生蛋白酶及其活力大小，可在酪素平板上看有无透明圈及其大小 2）精测(复筛):起定量的作用。试验要接近生产工艺条件 初筛工作量大,复筛手续繁琐.如二者结合,则可提高效率。例如： 1）柠檬酸生产菌黑曲霉的选育:采用微量滴管接种,纸片培养方法,根据指示剂变色圈直径的比值进行初筛 2）蛋白酶生产菌酱油曲霉的选育:根据酪蛋白培养基上透明圈直径和菌落直径的比值进行初筛； 3）头孢霉素生产菌的选育:按抑菌圈直径和菌落直径的比值进行初筛，其结果与摇瓶发酵产量一致，提高了筛选效率。 是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。 一种类型选择培养基是依据某些微生物的特殊营养需求设计的。如： ①利用以纤维素或石蜡油作为唯一碳源的选择培养基，可以从混杂的微生物群体中分离出能分解纤维素或石蜡油的微生物； ②利用以蛋白质作为唯一氮源的选择培养基，可以分离产胞外蛋白酶的微生物； ③缺乏氮源的选择培养基可用来分离固氮微生物。 另一类选择培养基是在培养基中加人某种化学物质．这种化学物质没有营养作用，对所需分离的微生物无害,但可以抑制或杀死其他微生物。如： ①加入数滴10％酚可以抑制细菌和霉菌的生长，用于分离出放线菌；