临床免疫学试验诊断.ppt

目的要求 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 肿瘤标志物的检测特征及其意义 自身免疫性疾病的特点和主要指标 酶联免疫吸附试验的原理，方法 酶免疫组化技术概念、过程及应用。 沉淀试验、凝集试验和标记技术原理 细胞因子的检测及临床应用 T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法 移植排斥反应的免疫学监测 外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测 临床免疫学实验诊断 实验诊断学 临床免疫学实验诊断 临床免疫学与免疫检验 免疫检验可分为两部分： 一部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质； 另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。 免疫学技术发展史 发展进程的主要阶段 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应） 加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术） 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合 免疫检验涉及的主要技术 放射免疫技术 化学发光免疫技术 荧光免疫技术 流式细胞免疫技术 酶联免疫技术 免疫印迹技术 透/散射免疫技术 单克隆抗体技术 化学发光/电化学发光技术 临床应用 （三）病毒感染免疫学诊断 思考题 分析自身免疫性疾病的特征 如何确定候选肿瘤标志物的检测参考值 设计实验证实某血清蛋白质与移植排斥有关 病毒性肝炎的免疫学检测和分子生物学检测特点 HIV感染的监测 * 自身抗体检测-抗核抗体 抗DNA抗体：天然/双链、变性/单链 间接免疫荧光法 ELISA RIA * 自身抗体检测-抗核抗体 抗ENA抗体：盐水可提取性核抗原的抗体。是抗小分子细胞核核糖核蛋白（snRNPs）和小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs）的自身抗体，不含组蛋白。 抗原进行SDS* 自身抗体检测-抗核抗体 抗ENA抗体： 抗u1RNP：混合结缔组织病MCTD 抗Sm、Rib：SLE 抗SS-A、SS-B：干燥综合征SS 抗Scl-70：硬皮病PSS 抗Jo-1：多发性肌炎/皮肌炎 PM/DM * 自身抗体检测-类风湿因子 抗变性IgG Fc自身抗体。并非RA特异抗体 ELISA 约90%（RA）患者RF阳性。IgA-RF与骨质破坏有关，早期IgA-RF升高常提示病情严重，预后不良；IgE-RF升高时已属晚期。 冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、SLE等患者都有较高阳性率；血管炎、肝病、慢性感染也可出现RF。　 * 淋巴细胞亚群 单克隆抗体将外周淋巴器官或外周血中T细胞分为CD4+和CD8+两个主要亚群。每个亚群按表面标志和功能分为不同亚群。 Th1和Th2亚群? 应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，CD4阳性细胞群分为Th1和Th2。Th1细胞合成IL-2/3、IFN-γ、TNF-α和GM-CSF，Th2合成TNF-α、IL-3/4/5/6/10/13、GM-CSF。 * 混合淋巴细胞反应 自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核细胞等非T细胞在体外培养时能诱导某些自身T细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞反应。这一部分T细胞称为自身反应性T细胞。 * 免疫复合物、补体检测 CIC增加，补体消耗，动态变化 总补体CH50：50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。 以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，50%溶血周围近似直线。 单一补体浓度 疾病进展、疗效 * 细胞因子检测 Th1、Th2平衡失调 细胞因子是一类在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或多肽。 淋巴因子、单核因子、各种生长因子等。 作用：参与免疫应答与免疫调节;刺激造血功能。 * ANA的检测方法 间接免疫荧光法 * 检测方案 * 检测方法 同ANA ELISA * 检测方法-免疫印迹法 * 检测方法-RIA法 γ计数器所测量放射性同位素的强度， 用得较多的标记化合物是14C、3H、125I、131I。 * 类风湿因子测定方法 胶乳凝集试验 速率散射浊度法 ELISA法 * 六 移植免疫学 * 预防排斥反应的免疫学措施 移植物预处理 组织配型 交叉配合试验 免疫抑制 免疫耐受 * 移植物预处理 灌洗：清除免疫细胞 加入单克隆抗体、补体 放射线照射 * 组织配型 组织相容性程度越高，存活几率越大 ABO血型必须相同或相容 HLA相容：HLA-A、HLA-B、HLA-DR 造血干洗胞移植：必须配合 心肾肠移植：HLA-DR 肝肺移植：主要ABO * HLA * HLA配型 * HLA配型 I