分子荧光与磷光光谱基本知识法.ppt

分子荧光与磷光光谱分析法;第一节 基本原理;一、荧光、磷光产生的机理; 激发态分子不稳定，它可能通过辐射跃迁和非辐射跃迁的衰变过程而返回基态。;振动弛豫：分子将多余的振动能量传递给介质而 衰变到同一电子能级的最低振动能级 的过程。;; 假如分子被激发到S2以上的某个电子激发单重态的不同振动能级上，处于这种激发态的分子，很快（约10-12~ 10-14s）发生振动弛豫而衰减到该电子态的最低振动能级，然后又经过内转化及振动弛豫而衰变到S1态的最低振动能级。接着，有以下几种衰变到基态的途径：;内转化速率很快（k为1011~ 1013s-1 ）， S2以上的激发单重态的寿命很短（ 10-1~ 10-13s ），因而除极少数例外，通常在发生辐射跃迁之前便发生了非辐射跃迁而衰变到S1态。所以所观察到的荧光寿命通常是来自S1态的最低振动能级的辐射跃迁??; 荧光是来自最低激发单重态的辐射跃迁过程所伴随的发光现象。发光过程的速率常数大，激发态的寿命短。;2、荧光、磷光的寿命和量子产率 ; 磷光寿命τp ：磷光分子处于T1激发态的平均寿命。; 荧光量子产率（?f）定义为荧光物质吸光后所发射的荧光的光子数与所吸收的激发光的光子数之比值。; 磷光量子产率（?p） ; 荧光（或磷光）量子产率的大小，主要决定于化合物的结构与性质，同时也与化合物所处环境因素有关。可用参比法进行测定。;二、荧光、磷光与分子结构的关系; 虽然很多物质能够吸收紫外和可见光，然而只有一部分物质能发荧光或磷光，分子能否发荧光或磷光，在很大程度上决定于它们的分子结构。;1、共轭π键体系 ;具有刚性平面构型的分子，其振动和转动的自由度减小，从而增大了发光的效率 ; 给电子取代基使荧光增强; 吸电子取代基使荧光减弱; π → π*：自旋许可的跃迁 摩尔吸光系数大， 104 激发态寿命短 S1 T1系间窜越概率较小 ;荧光： π→ π* n → π* 磷光： n → π* 有利;三、影响分子发光的环境因素; 荧光体的基态分子与溶剂分子形成氢键络合物，荧光物质的吸收光谱、荧光光谱都受影响，荧光体的激发态分子与溶剂分子形成氢键络合物，荧光光谱受影响。 ; 某些芳族羰基化合物和氮杂环化合物;如果荧光物质是一种有机弱酸或弱碱，它们的分子及其相应的离子，可视为两种具有不同荧光特性的型体，介质的酸碱性变化将使两种不同型体的比例发生变化，从而对荧光光谱的形状和强度产生很大的影响。;3 、介质的温度和黏度的影响 ;四．溶液荧光、磷光的熄灭 荧光的熄灭广义的包括了任何可使荧光增强度 降低的作用。狭义的仅仅指那些由于荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用所引起的荧光强度降低的现象，这些会引起荧光的熄灭的物质称为熄灭剂 。 狭义的荧光熄灭的原因是溶液中熄灭剂分子和 荧光物质分子之间发生相互作用而引起荧光物质分子的荧光效率降低或荧光物质激发态的寿命缩短，从而导致荧光强度的降低。 ;淬灭剂 动态淬灭 淬灭剂与发光物质激发态分子发生相互作用 静态淬灭 淬灭剂与发光物质基态分子发生相互作用;著名的熄灭剂: 卤素离子 重金属离子 氧分子 硝基化合物 ; 卤素离子对于奎宁的荧光有显著的熄灭作用，但对某些物质的荧光并不发生熄灭作用，这表明熄灭剂和荧光物质分子之间的相互是有选择性的。 荧光熄灭作用在荧光分析中有着降低待测物质的荧光强度的不良作用，但另一方面，我们可以利用某一物质对某一荧光物质的熄灭作用建立对该物质的荧光熄灭法检测。该法常具有更高的选择性。; 1.碰撞熄灭 溶液中荧光物质分子M和熄灭剂Q相碰撞 而引起荧光熄灭。 比较速率 M＋hυ→M*(吸光) 1 M* → M＋hυ (发生荧光) k1[ M* ] M* +Q M+Q+热 k2[ M* ][Q] ;Stern-Volmer方程式 k：熄灭常数 [Q]：熄灭剂浓度(M) F0,F分别是熄灭剂Q不存在时及存在时的溶液的荧光强度 ;2. 组成化合物的熄灭 某些荧光物质溶液在加入一