分子生物学检查版.ppt

染 色 体 图 象 分 析 系 统 人类染色体数目或结构畸变导致的遗 传性疾病称染色体病。 共同的临床特征： 先天性多发畸形、智力低下、生长发育迟缓和皮肤纹理改变。性染色体异常的患着还将出现内、外生殖器异常或畸形。 先 天 愚 型 核 型 图 先 天 愚 型 患 者 Turner综合征核型图 Turner综合征患者 4P三体综合征 4 P三体综合征 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 Oligo 1: Fluorescein Oligo 2: LC Red 640 Excitation Emission Transfer 荧光共振能量传递（FRET Probe） R Q 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ Excitation R Q Q R Q R Excitation 双标记探针（Taqman Probe） FQ-PCR反应原理 特异性荧光双标记探针 Taq酶 5’→3’外切酶活性 荧光PCR仪 FQ-PCR实时动力学曲线 FQ-PCR的技术特点 封闭状态下检测，避免了扩增产物污染而致的假阳性 可定量检测，扩展了临床应用空间 光谱技术进一步提高了灵敏度—可检测单拷贝基因 荧光探针杂交，进一步提高了特异性 扩增与自动分析一体化，检测更加简便快速 PCR在临床医学中的应用 早期诊断 病情评估和预后判断 抗病毒药物疗效的观察、指导 新药验证 输血源的筛选 母婴传播的控制与观察 遗传疾病的诊断 肿瘤的诊断 核酸分子杂交技术 ?核酸分子杂交？ ?常用的核酸分子杂交技术及应用 常用的核酸分子杂交技术及应用 ? Southern印迹杂交--DNA印迹 ? Northern印迹杂交--研究RNA的方法 ? 斑点杂交--狭缝杂交。DNA、RNA均可检测 ? 原位杂交--检测DNA或RNA同时还可对其进 行细胞及基因组内定位 单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism)SNP 指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。 SNP在人类基因组中广泛存在。是人类可遗传的变异中最常见的一种。 基因芯片技术逐步应用于SNP检测，使大规模进行SNP检测成为可能。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 SNP的意义和应用 疾病连锁分析和未知致病基因的定位 疾病的关联分析 复杂疾病或过程的基因定位 法医学应用 疾病发生的分子遗传机制的阐明环境因子 易感基因的检出 药物基因组学研究 器官移植配型和物种进化的研究 基因芯片Gene Chip 原理：是将大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。 基因芯片技术的应用 优生方面：避免许多遗传病的发生 疾病诊断方面： 器官移植、组织移植、细胞移植方面的基因配型 病原体诊断 §2 流式细胞术及其临床应用 流式细胞术 流式细胞仪组成及其工作原理 流式细胞术的临床应用 流式细胞技术 流式细胞技术是在流体状态下观察细胞状态的一种技术 能够对细胞或微球的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测 分类收集细胞 流式细胞仪 流动室和液流系统 激光源和光学系统 光电管和检测系统 计算机和分析系统 细胞分离纯化系统(有细胞分选功能时) 流式细胞技术工作示意图 流式细胞仪 流式细胞术的临床应用 免疫学：免疫活性细胞的分型与纯化、淋巴细胞亚群与疾病关系的分析、免疫缺陷病的诊断、器官移植后的免疫学监测 血液学：白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一 肿瘤学：鉴别良恶性肿瘤，预测预后，评估化疗药疗效 分子生物学:可在单细胞水平进行基因的表达、调控及功能研究。 §3染色体检查 染色体检查在临床医学上的意义 1、判定男女 §3染色体检查 染色体检查在临床医学上的意义 1、判定男女 2、诊断遗传病 3、优生优育 4、有助于白血病的诊断和分型 正 常 女 性 核 型 图 染色体检查的基本步骤 取材：主要采取外周血白细胞、皮肤组织、绒毛组织、羊水细胞、骨髓 细胞培养：加入丝裂原获分裂细胞，制成染色体标本 显微镜下进行初步的染色体观察和分析照相并进行核型分析 讨论分析结果并作出诊断报告 可编辑 可编辑 分子生物学检查 南方医院实验诊断学教研室 温淑娟 §1 基因诊断 §