PEG修饰β―谷甾醇制备新型绞股蓝总皂苷长循环脂质体探究.docxVIP

PEG修饰P 一谷笛醇制备新型绞股蓝总皂昔 长循环脂质体探究 ［摘要］目的：探讨用聚乙二醇(PEG)修饰B-谷笛 醇(PEG-Sito)制备新型绞股蓝总皂昔长循环脂质体的可行 性。方法：以丁二酸酉干为连接臂连接B-谷笛醇与PEG 2000 合成PEG-Sito；以鞘磷脂和PEG-Sito为膜材采用乙醇注入 法制备绞股蓝总皂昔长循环脂质体；脂质体以鱼精蛋白沉淀 法进行包封率的测定；1H-NMR验证PEG-Sito的合成；粒径、 电位、AFM电镜表征该新型绞股蓝总皂昔长循环脂质体。结 果：1H-NMR证实了 PEG-Sit o的合成成功，采用乙醇注入法 用PEG-Sito为材料制备长循环脂质体的包封率为74. 3%,粒 径28 1 nm,电位-20. 25 mV,电镜下呈规则圆形。结论： 用PEG-Sito为材料制备绞股蓝总皂昔长循环脂质体方法可 行，绞股蓝总皂昔包封率高，形态和粒径均较好。 ［关键字］绞股蓝总皂昔；长循环脂质体；B-谷笛醇； 聚乙二醇 脂质体由于具有缓释、增效、减毒、靶向等优点，是中 药传递系统中最受关注的热点［1-2］ o近年来发展的长循环 脂质体或隐形脂质体(long-circulating liposomes , stealth liposomes) ［3］是通过将聚乙二醇-二硬脂酸磷脂 酰乙醇胺(PEG-DSPE)镶嵌在脂质体双层膜之间，PEG的 长链在脂质体表面形成空间位阻和亲水保护层，能阻止吞噬 细胞对脂质体的的识别和摄取而极大地延长脂质体的血循 环时间，便于药物进入病变组织，提高治疗指数和疗效 ［4-5］,但由于磷脂价格较高，PEG修饰后价格更加昂贵，且 DSPE, PEG均为大分子，与硅胶有很强的吸附性，合成后分 离纯化相当困难，得率极低，大大限制了长循环脂质体在制 剂领域中的应用［6］。 本课题组前期已论证了以不引发心血管疾病的植物笛 醇替代胆固醇来稳定脂质体、构建脂质体的可行性［7］,又 论证了采用新型磷脂一一鞘磷脂制备高稳定性的脂质体的 可行性［8］。在本课题中，笔者避开用PEG对磷脂修饰制备 长循环脂质体的常规思路，采用PEG对价格相对低廉的小分 子笛醇进行修饰，得到聚乙二醇-B-谷笛醇（PEG-Sito）, 然后以PEG-Sito为长循环材料和近年来被发现具有显著的 抑制肿瘤作用的绞股蓝总皂昔（gypenosides）为模型药， 对用PEG-Sito制备绞股蓝总皂昔长循环脂质体的可行性进 行了探讨，为中药长循环脂质体的开发提供一种新的思路， 具有较大的理论及应用价值。 1材料 Model RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生物仪器公司）; AVYIII-500 MHz核磁共振仪（美国bruker公司）；360型傅 立叶变换红外光谱仪（Wartars公司）；SHB-III循环水式多用 真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；HZQ-X280恒温振荡培 养箱（太仓市华美生化仪器厂）；BS210型电子天平；WFJ2000 可见分光光度计；KBS-150型数控超声波细胞粉碎机（昆山 市超声仪器有限公司）；SCZL-A型数字智能控温磁力搅拌器 （郑州长城科工贸有限公司）；数显恒温水浴锅HH-2 （国华 电器有限公司）；原子力显微镜AFM （Veeco公司）；LGJ-10 冷冻干燥仪（北京博医康实验仪器有限公司）。 绞股蓝总皂昔（陕西昂盛生物医药科技有限公司，批号；鱼精蛋白（Sigma公司，批号P4672）；绞股蓝 皂昔对照品（阿拉丁，批号D100246）；香草醛（上海晶纯实 业有限公司，批号V100115）；鞘磷脂（Sigma公司，批号 E1028）； B-谷笛醇（杭州大阳化工有限公司，质量分数97%）； 丁二酸酉干（国家集团化学试剂有限公司）；4-二甲氨基毗噪 （DMAP）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐 （EDC）、磷钮酸均购于阿拉丁，其他试剂为分析纯。 2方法与结果 2. 1 PEG-Sito 的合成［9］ 2. 1. 1 PEG-Sito的合成 路线具体合成路线见图lo 2. 1.2 B-谷脩醇衍生物的制备［10］将B-谷笛醇 （Sito） （2. 50 g, 6. 03 mmol）, 丁二酸酉干（3. 25 g, 32.48 mmol）, DMAP （0. 40 g, 8. 19 mmol）溶于 50 mL 二氯甲烷中， 在45 °C下剧烈搅拌回流48 ho二氯甲烷溶液用1 mol ? L-1 (50 mLX3)盐酸溶液洗涤，Na2S04干燥在旋转蒸发仪上旋 干，得白色固体(suc-Sito) 2. 80g,收率90.3%。B-谷笛 醇衍生物(suc-Sito)经薄层色谱(TLC)鉴定，Rf=0. 7 (氯 仿-甲醇 12 : 1, 5%磷钮酸显色)；1H