UPLCMSMS测定青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素和大鼠血浆药代动力学探究.docx

UPLC—MS/MS测定青蒿素代谢抑制剂猫眼草 黄素和大鼠血浆药代动力学探究 ［摘要］目的：建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中 青蒿素代谢抑制剂猫眼草黄素(chrysosplenetin, CHR)的 体内分析方法，并考察其药代动力学参数。方法：血浆样品 以乙月青沉淀蛋白；采用Shim-pack XR-ODS C18色谱柱(2.0 mm X 100 mm, 2. 2 um),以地西泮为内标，流动相为甲醇 -0. 1%甲酸水溶液(87 : 13)；质谱条件为电喷雾离子源(ESI 源)，正离子模式检测；样品分析时间为2 mine结果：CHR 在5?5 000 ug?L-l线性良好(r=0. 999 3),提取回收率 为69. 0%?81. 2%,日内、日间精密度和准确度符合要求°CHR 口服吸收差，存在双峰甚至多峰现象；静脉注射消除半衰期 短，低、中、高剂量组tl/2分别为(17.01±8.06), (24. 62±4. 59), (28. 46±4. 63) min。结论：该方法特异、 快速、灵敏，可用于CHR药代动力学分析。 ［关键词1UPLC-MS/MS；猫眼草黄素；药代动力学；血浆; 大鼠 猫眼草黄素(chrysosplenetin , CHR)是一种多甲氧 基黄酮，广泛存在于黄花蒿［1-2］、泽漆(俗称猫眼草)、岩 筋菜、细花线纹香茶菜［3］等多种植物中。研究人员［4］发现 CHR对手足口病主要病原体肠道病毒71 (EV71)具有较强的 抑制活性，能有效抑制病毒RNA的合成，且对多种人肠道病 毒都表现出相似的抑制活性。此外，文献还报道［5］黄花蒿 叶片中的多甲氧基黄酮如CHR、紫花牡荆素等可显著提高青 蒿素的抗疟活性；本课题组也发现CHR可通过显著抑制与青 蒿素代谢相关的CYP450酶亚型的活性，从而提高青蒿素的 体内抗疟活性，确定了青蒿素-CHR复配抗疟比例为1：2, 显现出良好的青蒿素肝代谢抑制剂的开发前景。但CHR的溶 解性极差，其药代动力学过程可能存在着难溶性药物共有的 特点和缺陷，本实验旨在建立简单、快速、可靠的 UPLC-MS/MS,以评价CHR在大鼠体内的药代动力学过程，为 青蒿素代谢抑制剂CHR的进一步开发利用奠定基础。 1材料 超高效液相色谱仪（日本岛津公司NexeraUHPLC LC-30A 型），质谱（美国AE公司API4000型液相色谱串联质谱联用 仪），配有电喷雾离子化源（ESI）和AnaLyst 1. 5. 1分析操 作软件；低温高速离心机（Z323K型，德国HERMLER公司）； 分析天平（AE240型，瑞士 MettLer-ToLedo公司）。 CHR （纯度398%,由本实验室制备），地西泮（中国食 品药品检定研究院，批号115-9302）,乙睛、甲醇、甲酸均 为色谱纯，Fisher公司；去离子水（Milipore）。 SD大鼠，30只，雌雄各半，体重（210±20） g,由宁 夏医科大学实验动物中心提供。 2方法 1对照品溶液配制 CHR标准溶液的配制：精密称取CHR对照品10 mg,置 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成1 g ? L-1的储备液I,以流动相甲醇为稀释溶液，逐步将储 备液I稀释成50 mg?L-1的储备液II 10 mL,置于4 °C 冰箱内保存待用。 内标地西泮溶液配制：精密称取地西泮10 mg置于10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成lg?L-1 的储备液III,以流动相甲醇为稀释液，逐步将储备液III 稀释成为20 ng?L-1的地西泮溶液10 mL,放置4 °C冰 箱内保存待用。 2色谱条件 Shim-pack XR-ODS C18 色谱柱 (2.0 mm X 100 mm, 2 Li in), ODS C18 保护柱(2 mm X 5 mm, 2. 2 u m),流 动相为甲醇-0. 1%甲酸溶液(87 : 13),柱温30 °C,流速0.3 mL ? min-1,进样量 10 uL。 3质谱条件 离子化源为ESI源，电喷雾电压为4kV,离子检测方式 为正离子检测，碰撞气压力为1.73X10-2Pa,喷雾压力为 36 V,加热温度为500 °C,所用气体为氮气。CHR的m/z [M+HJ+375. 5,定量离子m/z 317. 2；地西泮(内标)m/z [M+Hl+316. 2,定量离子 m/z 为 163.0,见图 1。 2.4血浆样品的处理 精密吸取血浆100 uL,置10 mL具塞玻璃离心管中， 精密加入地西泮(20 Pg - L-1) 20 uL,涡旋振荡30 s, 加入0. 3 mL的乙月青，涡旋振动3 min, 14 000 r ? min-1, 低温离心10 min,吸取上清液，取10 uL进样分析。