试验细菌的芽孢染色法.ppt

实验五、细菌的芽孢染色法 * 一、实验的目的要求 * 学习并掌握芽孢染色法 初步了解芽孢杆菌的形态特征 二、实验原理 芽孢又称内生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形状、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 芽孢壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状），而一旦染上色后又难以脱色。 芽孢染色法根据芽孢特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 细菌芽孢的基本构造 * 孢外壁 芽孢衣 皮层 芽孢壁 芽孢质膜 芽孢质 芽孢核区 　芽孢具有多层厚而致密的胞膜，由内向外依次为核心、内膜、芽孢壁、皮质、外膜、芽孢壳和芽孢外衣 . 细菌芽孢的基本特性 * 形成芽孢需要一定的外界条件，这些条件因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2)条件下才能形成芽孢，而破伤风芽孢杆菌则在无氧条件下形成芽孢。通常细菌在营养不足时形成芽孢，但苏云金芽孢杆菌是例外。 细菌芽孢的基本特性 * 芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力，尤其耐高温。有的芽孢可耐100℃沸水煮沸数小时。在一定条件下，芽孢保持活力数年至数十年之久。高温灭菌的判断标准就是细菌的芽孢是否被杀灭。 细菌芽孢的基本特性 * 芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、乳酸和水分，会发芽形成菌体，但细菌的数量并未增加，所以芽孢不是一种繁殖方式。 芽孢抵抗力强的原因 * 1.芽孢含水量少，蛋白质受热后不易变性； 2.芽孢具有多层致密的厚膜，理化因素不易透入； 3.芽孢中含有一种特有的化学组分吡啶二羧酸（DPA），DPA与钙结合生成的钙盐能提高芽孢中各种酶的热稳定性。 三、实验器材 1.菌种：枯草芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌。 2.染色剂： 5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 3.仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。 四、实验方法（Schaeffer－Fulton氏染色法） 1.制片：常规方法涂片、干燥、固定。 2.染色：(1) 涂片上滴加3－5滴5%孔雀绿水溶液。 (2)用试管夹夹住载玻片一端，微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，计时5min。加热过程中切勿使染料蒸干，及时补加染液。待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。 (3)0.5%碱性番红复染2min，水洗。 (4) 制片干燥后油镜观察。芽孢呈绿色，菌体红色 五、实验报告 绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态，芽孢的着生位置。 六、思考题 1．为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色? 2．试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位。