一氧化氮途径介导人参总皂苷对大鼠右室肥厚抑制作用.docx

一氧化氮途径介导人参总皂昔对大鼠右室 肥厚抑制作用 ［摘要］目的：观察人参总皂昔(TG)对野百合碱 (MCT)所致大鼠右心室肥厚的影响并探讨其与一氧化氮途 径的关系。方法：雄性SD大鼠随机分为：正常对照组、模 型组、TG 低、中、高剂量组(20, 40, 60 mg - kg-1 - d-1) 以及 L-精氨酸组(L-arg, 200 mg ? kg-1 ? d-1, L-a 组)； 另外，为探讨TG的作用与NO释放的关系，另设TG+L-N (NOS 合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸-甲酯，L-NAME)组和L-a+L-N 组。在腹 腔注射 TG 40 mg ? kg-1 - d-1 或 L-arg 200 mg ? kg-1 ? d-1,各组动物均给药18 do测定各组大鼠的右 mg ? kg-1 ? d~l的同时分别灌NOS mg ? kg-1 ? d~l 的同时分别灌 NOS抑制剂L-N 20 心室收缩压(RVSP)、右室肥厚指数(RVHI)、右心重/体重 (RVW/BW)；透射电镜观察心肌细胞超微结构的改变；硝酸 还原法检测心肌组织N02-/ N03-的含量;Real time RT-PCR 检测心肌组织心房利钠因子(ANF)、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS) mRNA的表达。结果：TG低、中、高剂量和L-arg 预防给药均使RVSP, RVSP, RVHI, RV/BW及ANF mRNA表达 明显降低(P93%)。MCT (批号106K1602,美国Sigma公司); L-精氨酸(L-arginine , L-arg )及 L-NAME ( Alexis biochemical公司)；NO检测试剂盒(南京建成生物公司)， eNOS, 3 -action和逆转录试剂盒（大连宝生物工程有限公 司）；SYBR GREEN PCRMaster Mix （ABI 公司）。 1.3仪器 实时荧光定量PCR仪（美国BIO-RAD公司）； 逆转录仪（德国Eppendorf公司）；Model 550型酶标仪（美 国Bio-Tek公司）；Icycler荧光定量PCR仪（美国BI0-RAD 公司）。 2方法 2. 1MCT心肌肥厚模型制备和分组实验大鼠随机分成正 常对照组、MCT模型组、TG低、中、高剂量组丄-a组（L-arg）、 L-arg加NOS合酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸-甲酯（L-NAME） 组（L-a+L-N 组）、TG 40 mg ? kg-1 ? d-1 加 L-NAME 组（TG+L-N 组），每组10只。除正常对照组外其他各组单次腹腔注射（ip） 2%MCT 60 mg - kg-1 , 24 h 后分别 ip TG 20, 40, 60 mg ? kg-1 ? d~l, L-arg 200 mg ? kg-1 ? dT, L-a+L-N 组和 TG+L-N 组 ip L-arg 200 mg ? kg-1 ? d~l 和 TG 40 mg ? kg-1 ? d~l 同时灌胃 L-NAME 40 mg ? kg-1 ? dT,给药 共 18 do 2. 2右心室收缩压的测定造模18 d后，采用右心导管 术[7],检测右心室收缩压（right ventricular systolic pressure, RVSP）。 2. 3右室肥厚指数测定称右室（RV）和左室及室间隔 （LV+S）的质量,计算右心肥大指数，即RVHI二RV/ （LV+S） 以及右室/体重(RV/BW)o 2. 4右心肌组织超微结构的观察 取新鲜右心室组织约1 mm3,电镜液中固定，环氧树脂包埋，铀铅双染色，超薄(600 A)切片，日立H-600型透射电镜观察各组标本细胞核、细 胞器、线粒体等超微结构的变化。 2. 5心肌组织亚硝 酸盐/硝酸盐含量的测定按N0检测试剂盒所示方法，即硝 酸还原法检测心肌组织NO的代谢产物N02-/ N03-的量，间 接地反映NO的含量。 2. 6Real-time RT-PCR 检测心肌组织 ANF, eNOS mRNA 的表达右心肌组织总RNA的提取及逆转录操作按试剂盒说 明进行。根据Fenbank数据库中提供的ANF, eNOS和B -actin mRNA序列，由大连宝生物工程有限公司合成引物。ANF (NM 012612 ) F : 5’ -TGACAGGATTGGAGCCCAGAG-3 , R : 5’ -TCGAGCAGATTTGGCTGTTATCTTC-3z ； eNOS (NM 021838) F : 5’ -GGACTGAAGGCTGGCATCTGG-37 , R : 5’ -CATGTTACTGTGCGTCCACTCTGC-3z ； P-actin(NM 031144) F : 5Z -GGCCAAC