试验十染色体C显带法试验.ppt

C带 将中期染色体先经盐酸，后经碱（如氢氧化钡）处理，再用吉姆萨染色 * * 染色体C显带法 实验十 ——全部遗传与遗传学的基础 染色体带型是鉴别染色体的重要依据。通过分带机 理的研究,可获得染色体在成分、结构、行为和功能 等方面的许多信息. 染色体分带的研究工作始于60年代末。染色体分带 技术是经理化因素处理后，用染色法使染色体呈 现特定的深浅不同的带纹的方法，又称显带技术。 在细胞遗传学和遗传学理论研究中、在医疗诊断、 动植物育种等方面，分带技术都是一种用途广泛的 重要技术。 一、实验目的 初步了解什么是染色体带型，掌握染色体C显带方法。 带型（banding pattern）：即染色体带型。借助细 胞学的特殊处理程序，使染色体显现出深浅不同的 染色带。其数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相 对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模 式，即称带型。 1、Q带技术：所显示的是中期染色体经芥子喹吖因染色后在 紫外线照射下所呈现的荧光带，这些区带相当于DNA分子 中A-T碱基对成分丰富的部分。 2、G带：即吉姆萨带。是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、 热、尿素等处理后，再经吉姆萨染料染色后所呈现的区带。 3、C带：又称着丝粒异染色质带：是将中期染色体先经盐酸， 后经碱（如氢氧化钡）处理，再用吉姆萨染色，显示的是 紧邻着丝粒的异染色质区。 4、R带：是中期染色体不经盐酸水解或不经胰酶处理的情况 下，经吉姆萨染色后所呈现的区带，所呈现的是G带染色后 的带间不着色区，故又称反带。 5、T带：又称端粒带（高分辨染色体）。是染色体的端粒部位 经吉姆萨和吖啶橙染色后所呈现的区带，典型的T带呈绿色。 二、实验原理 1、染色体标本经Ba(OH)2热处理后，在着丝粒周围 区域和异染色质区经Giemsa染成深色，而染色 体两臂的常染色质部分仅有浅淡轮廓。这是一种 染色体上不显示带纹的特殊显带法，主要显示着 丝粒区和异染色质区的变化。这种技术称为着丝 粒(centromere)区异染色质法，简称C带。常称 为CBG法(C-band by Barium hydroxide using Giemsa)，即C带，用Ba(OH)2处理后，Giemsa 染色。 2、产生Ｃ带的机理，目前认为用氢氧化钡和盐类 处理染色体，能从染色体中提取高达80％的DNA, DNA被优先地从非Ｃ带区提出，结果染色体臂着 色浅而着丝粒异染色质着色深。研究表明，着丝 粒异染色质仅与组蛋白结合，而常染色质含有大 量非组蛋白蛋白质。 一般认为，活跃的染色质比遗传上不活跃的染色 质更富以非组蛋白。这说明，仅与组蛋白结合的 染色质比含有大量非组蛋白的染色质结构紧密得 多。也就是这种紧密的结构保护着丝粒的异染色 质免受氢氧化钡和盐类的破坏，从而产生Ｃ带。 显示的是紧邻着丝粒的异染色质区 又称着丝粒异染色质带 人类23对染色体C显带核型图 人类23对染色体的G显带核型图 三、实验材料 小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留用的标本片。 四、实验器具和试剂 器具：显微镜、恒温水浴锅、镊子、切片架、 切片盒、染缸、量筒、吸管、滤纸等。 试剂：0.2N HCl，5% Ba(OH)2， 2×SSC缓冲剂（用 1 M HCl， 先加3M的氯化钠，再加 0.3M的柠檬酸钠，最后用1M盐酸把pH调 整到7.0 ） Giemsa染色液。