马铃薯两个种间体细胞杂种创制与结薯特性研究-蔬菜学专业论文.docxVIP

华中农业大学2016届硕士学位论文2．2．10体细胞杂种的农艺性状观察 华中农业大学2016届硕士学位论文 2．2．10体细胞杂种的农艺性状观察 13 2．2．1 1病毒抗性鉴定 ．14 2．2．12晚疫病抗性 ．14 2．2．13花粉活力检测 ．14 3结果与分析 ．．1 5 3．1融合亲本etbl的抗性鉴定 15 3．1．1病毒病抗性鉴定 ．1 5 3．1．2晚疫病抗性鉴定 ．16 3．2不同融合亲本的试管苗苗龄 16 3．3不同融合亲本的适宜酶解时间 16 3．4不同培养阶段的培养方法与形态特征 17 3．5基因型对原生质体融合培养的影响 20 3．6体细胞杂种的鉴定 ．20 3．7体细胞杂种的倍性分析 22 3．8体细胞杂种的晚疫病抗性鉴定 24 3．9体细胞杂种的形态特征调查 24 3．10部分体细胞杂种花粉活力检测 32 3．11体细胞杂种结薯特性分析 一 ．33 4讨论 37 4．1基因型对原生质体培养的影响 37 4．2马铃薯叶肉原生质体融合体系 37 4．3再生植株的倍性水平 ．38 4．4体细胞杂种的结薯特性差异 38 4．5马铃薯体细胞融合技术的思考 39 4．6本研究的展望 ．40 参考文献 ．．41 附录 ．．50 致谢 51 II 万方数据 马铃薯两个种间体细胞杂种创制与结薯特性研究摘 马铃薯两个种间体细胞杂种创制与结薯特性研究 摘 要 马铃薯($olanum tuberosum L．)是世界第四大粮食作物，其野生种中含有丰富 的抗性资源和特殊的性状。但很多野生种与栽培种之间由于胚乳平衡数(EBN)的 差异，存在杂交不亲和现象。Solanum etuberosum是马铃薯野生种之一，天然不结 薯，且具有很多生物和非生物抗性，无法与栽培种直接杂交。块茎作为马铃薯的重 要经济器官和繁殖器官，其形成受多种因素影响。本研究利用＆etuberosum不结薯 这一特性，将其与三个马铃薯二倍体分别进行体细胞杂交，以期获得结薯能力存在 显著差异的体细胞杂种，并分析体细胞杂种的结薯遗传特性。与此同时，可以将野 生种中的抗性基因转移到栽培种中，创制抗性新种质。现得到的主要研究结果如下： 1．利用体细胞杂交技术，将＆etuberosum分别与能够结薯的二倍体材料 ACl42、XD．3、USW4进行叶肉原生质体融合，成功锝到etbl+ACl42和etbl+XD．3 两个融合组合的128份再生植株。随后利用SSR引物对再生植株进行杂种鉴定，结 果表明，etbl+ACl42组合的95个再生植株中，93个为体细胞杂种，杂种植株率高 达97．90％；而etbl+XD．3组合的33个再生植株中，22个为体细胞杂种，杂种植 株率为66．67％。采用流式细胞仪对体细胞杂种的倍性进行分析，结果表明，体细 胞杂种倍性从三倍体到八倍体均有分布，其中以六倍体为主，还有少量的混倍体植 株存在。 2．etbl+ACl42体细胞杂种的农艺性状调查结果表明，四倍体杂种的生长势明 显优于六倍体杂种，也优于其它倍性植株。植株形态多为双亲的中间型，且四倍体 和六倍体植株绝大部分可以正常开花，花粉活力分布于0．36．23％之间不等。此外 采用晚疫病小种16．2和3928A离体接种etbl+ACl42体细胞杂种复叶鉴定晚疫病抗 性，结果表明，所有被检测杂种均表现为感病。随后对etbI+ACl42体细胞杂种的 结薯特性进行分析，绝大部分体细胞杂种均可以结薯，但不同倍性，甚至同一倍性 的株系之间在结薯数量和薯重方面存在明显差异，为进一步研究马铃薯块茎发育奠 定材料基础。 关键词：马铃薯；原生质体融合；体细胞杂种，结薯特性；晚疫病抗性 万方数据 华中农业大学2016届硕士学位论文Abstract 华中农业大学2016届硕士学位论文 Abstract Potato(Solanum tuberosum L．)is the fourth largest food crop in the world，and its wild species is rich in resistant resources and special characters．However，there is cross—incompatibility between the wild species and the cultivated species as the result of the difference in Endosperm Balance Number(EBN)．Solanum etuberosum is one of the wild potato species which is naturally lack of tubers．It has a lot of biologica