中华大蟾蜍蟾酥中蟾毒内酯类化学成分探究.docx

中华大蟾蛛蟾酥中蟾毒内酯类化学成分探究 ［摘要］采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色 谱、制备型高效液相等方法从蟾酥的二氯甲烷萃取部位中分 离得到12个蟾毒内酯类化合物，根据化合物的理化性质和 波谱数据分别鉴定为脂蟾毒配基（1）、蟾蛛它灵（2）、去乙 酰华蟾蛛精（3）、19-氧去乙酰华蟾蛛它灵（4）、华蟾蛛它 灵（5）、13基蟾蛛灵（6）、12a-密基蟾蛛灵（7）、蟾 赊它里灵（8）、嚏根草配基（9）、远华蟾蛛精（10）、嚏根 草醇（11）及华蟾赊精-3-辛二酰甲酯（12）。化合物7和12 为首次从蟾酥中分离得到，且为新天然产物。 ［关键词］中华大蟾蛛；蟾酥；蟾毒内酯；化学成分 ［收稿日期］2013-10-28 ［基金项目］国家自然科学基金项目 ［通信作者］*田海妍，副研究员，研究方向为中药及天 然药物有效成分研究，Tel: （020） E-mail： tianhaiyanl982@163? com ［作者简介］张鹏伟，硕士研究生，Tel: （020 E-mail： pengwei? zhang@yahoo. com 蟾 酥Venenuni Bufonis为中华 大蟾蛛Bufo bufo gargarizans Cantor 或黑 眶蟾蛛 B. melanostictus Schneider的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液经加工干燥而 成，具有解毒、止痛、开窍醒神之功效[1]。现代药理学研 究表明蟾蛛内酯类化合物是中药蟾酥的主要活性成分。蟾酥 总提物及其单体化合物均显示了明显的抗肿瘤活性[2-3] o 由蟾皮制成的华蟾素注射液在临床上广泛用于肿瘤的治疗 [4-5] o近年来，蟾酥中强心笛类化合物引起人们的广泛关 注，除了具有显著强心活性外，还显示了很强的抗肿瘤活性, 部分该类化合物具有较好的新药开发前景[6-8] o因此，对 于中药蟾酥中蟾毒内酯类化学成分进行研究有重要的意义。 本研究对蟾酥的二氯甲烷萃取部位进行了系统化学成 分研究，从中分离得到了 12个强心笛类化合物，利用1H, 13C-NMR以及与文献数据对比等手段，鉴定了这些化合物的 结构，分别为脂蟾毒配基（1）、蟾蛛它灵（2）、去乙酰华蟾 蛛精（3）、19-氧去乙酰华蟾蛛它灵（4）、华蟾蛛它灵（5）、 1B-释基蟾蛛灵（6）、12a-B基蟾蛛灵（7）、蟾蛛它里灵 （8）、嚏根草配基（9）、远华蟾蛛精（10）、嚏根草醇（11） 及华蟾蛛精-3-辛二酰甲酯（12）。其中化合物7和12为首 次从蟾酥中分离得到，且为新天然产物（图1）。 1材料 北京泰克仪器公司X-5型显微熔点测定仪（温度计未 校正）测定；日本JASCO P-1020型旋光仪测定；Bruker AV-400 型超导核磁共振仪；Finingan LCQ Advantage MAX 质 谱仪，Agilent 1200分析型高效液相色谱仪，伍丰LC-100 液相色谱仪，Ultimate XB-C18 （4. 6 mmX250 mm, 5 u m, Welch Materials）分析柱，Cosmos订 ODS （4. 6 mmX250 mm, 日本 Nacalai Tesque Inc）制备柱，Sephadex LH-20 凝胶 （Pharmacia公司），柱色谱用硅胶（青岛海洋化工），薄层 硅胶板（烟台化学工业研究所），RP-18 F254薄层预制板和 ODS RP-18柱色谱材料（Merck公司），所用试剂均为分析纯 和色谱纯。 实验用药材蟾酥于2008年8月自江苏宝应蟾蛛养殖基 地采集。经暨南大学周光雄教授鉴定为中华大蟾蛛B. bufo gargarizans的蟾酥。标本（No. 2008082001）保存暨南大 学中药及天然药物研究所。 2提取与分离 蟾酥药材1.5 kg粉碎成粗粉，10倍量95%乙醇超声提 取3次，每次45 min （40 °C, 100%功率），合并提取液， 过滤，减压浓缩得浸膏约900 g,混悬于20%乙醇中，CH2C12 萃取3次，合并萃取液，减压浓缩得二氯甲烷的萃取部分321 go TLC薄层及HPLC分析，显示CH2C12萃取部分主要为蟾 毒内酯类化合物。取二氯甲烷的萃取部分150 g,经硅胶柱 色谱（100?200目），环己烷丙酮梯度洗脱（1 ： 0, 5 : 1, 3 : 1, 1 : 1, 0 : 1）,共得到 15 个流分（Fr. 1 ?Fu 15）。 图1化合物1?12的结构 Fig. 1 Chemical structures of compounds 1-12 Fr. 4经RPHPLC (60%甲醇)分离得化合物1 (77. 2 mg)； Fr. 5经硅胶柱色谱(200?300目)，环己烷丙酮梯度洗脱