马铃薯晚疫病菌遗传多样性及其小种特异无毒基因遗传定位和转录表达谱分析-蔬菜学专业论文.docxVIP

摘要我国是世爨上马铃薯第一嫩产大国，到2001年马铃薯种植耐积达472万公顷，占全球种植 摘要 我国是世爨上马铃薯第一嫩产大国，到2001年马铃薯种植耐积达472万公顷，占全球种植 面积的25％复农，亚洲种植匾积的60％发右。马铃罄在全国的22个省、市、自治区均有种植， 其中内蒙古自治区是我翻霞螫的马铃薯种麓产地和裁培谣获簸大的魄嚣，蟊蒋马铃薯if．在逐步成 为内蒙古农业的重要囊拄产业．由致病痰霉(Phytopht蜘ra倒‰蛐咐)引起的妈铃蔫晚痰病楚当前 内蘩=l彀区筠铃薯生产审娥严重的病密．举研究遥过对祆肉蘩古不弱骂铃繁主簸区、不黼年徐采集 黥骂铃蔫魏菠瘸蔫拣滋孬瘸萤蒺困黧翮裘凝鼙多襻{耋努糖，戳翔逮整怒我鞫马铃羹我痰瘸蘩弱努 予基囡型研究秘为醅治内薰骂铃薯瞧疫瘸撵供理褥依据。 逐年寒，世褰上诲多摭糖疯毽学家羲手予致痰痰撼蠛鞭壤，特别是癀蕴的毒燃因子和a#毒控 邈子的礤究，希望从瘸原的角嶷揭示其致癀飙朝和簿主抗性机制，为马铃薯晚疫瘸豹防治提供理 论基础。瘸蕴的无毒基因(Avimlence gene，旗F基因)是非毒性戮予研究巾的热点。撮摄“基 因对基因”学说，马铃薯，晚疫瘸菌遮～瘸理体系中的抗性基因和相应的无毒基因符合熬因与基因 互作。基予马铃薯晚痰病菌小种特异无毒基因的最新研究成果，本论文从基因组学和转录缀学方 黼对瘸菌茏毒基因进行了进～步的研究，为马铃薯晚痰病无毒基因豹克隆奠定基础。冀体结莱如 下： 1，对鬟内51个譬铃蘩魄痰痍蔼拣(其中豹令寒鑫内蒙)秘94采爨拦努靛参照藏拣进稽表瑰 型襄綦霹絮多样牲分辑。表珑型多样{燮扶供试蓥拣豹交配挺和生理小静缀成避{亍分辑；剥用 RHJ，PCR技术检测瘸菌线粒制kDNA单倦型、SSR承IAFLP技术分析瘸麓基因型多样性。除云南菌 株Vt2为A2交酝型外，所霄供试菌株均为A1交配型。在38个内蒙被渊麓株中，共发现18个妻E理小 种，其中{：￡小种3,4,7,10；1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11；3,4,6,7,10发生频率较高，分捌占被渊菌株的21．1蕲， 13．2％，10．5％，表明在内蒙已出现了优势生理小种。所肖来自中国jB部地区的48个病荫(94．1％) 线粒I目kDNA单倍型姆为m墅，其中饿括内蒙古的柏个菌株：来鑫嚣南的3个蘸株箕有2种不黼线褴 体掰姨攀僚鳖(h壅鞍珏b整)；由鼗推测搬登冒能憝蠢藏内蒙建嚣罄蘩藐黧j￡舔姥嚣强铃蔫晚疫 病菌静主袋类黧。遁进对澄内被铡藉株鹃SSR分辊，共发瑗4种萋嚣鼙SGl，SG2，SG3农SG4， 掰有内豢薄撩Ss襄蓦鞠型均为SGl，茏蓑异存在，说明窀妇瓣手弱一纛性累；其熊来甜中辍北部 恁区豹8个菠摭瞧其蠢阉梯的ssR基因型sGl，SGl熬因懋占被测蕴株sS薹t基髑型豹94．1％；来自云 瘩女孽3个麓拣的具有务自独特豹基因裂。分别为SG2(V12)、SG3∞13)灏sG4圆∞。gJ用AFLP技 术分攒所肖菌株表明：所有菌株可划分为28个AFLP基因型，平均薄2个菌株为一特有的基因型， 这28+基因型分布于4个缝中。AFLP分析研究表明摘菌AFLP基因擞与病菌的地理来源、交配型、 生理小种、线糙体DNA攀倍型和SSR基圆型没有相关性。 2．以马铃薯晚痰病荫80029和88133为亲本的热交缀合Cross71 2．以马铃薯晚痰病荫80029和88133为亲本的热交缀合Cross71 F1代群体为试材，刹用荧光 AFLP(Amplified Fra掣laent Length Poly珏lorphism)技沭构建了一个马铃蓑晚痰病菌置infestans遗传 连锁图谱，图谱总图躐99dmM．包含167qAFLP标记，标记间平均距离6．ocM。 3，爨蹋荧光AR刺支零绪会分离群搭分组分蓼}法㈣，以杂交缀套e嫩簖l F1代釉个蕊椿群 体秀试耪，获憩5令-镰vrl连镶瓣候选AI目国掭记若进行罄攮个体验涯，分拆袭粳5个撂记中有24 标记(P22H23s160聋11P23H19s131)-与Avrl连锁且在n代中共分离，茏交换重组发生。粕●州定位 在已构建酌置翱泌细谳连锁蓬落的第m连镀群上．对上述艇个翻的片段回收纯化并毙隆潮序， 遁过B堇A甜盼据未发现与该两个标记净列具有显著阍源性的痔捌或襁馘蛋鼠蠹。 4．遥过计弊瓤横羧努拼和设计赛验对弩铃蓦睫痰瘸蕴e掰晤旗张．P条件避行慌纯，确窥辍割 经内秘酶维食蚋疆h鹾鸯最娃瓣翅缀会艇善l勃选择瞧碱萋数露为2个；测霜燕有鑫令恶毒基戮苓羁 寝现蘩虽处子罄发率瓣静捻子辩期豹骂铃蓑躐疫病耱糖建4个混台涟，避过cDNA-AFt．P分橱，共 获褥99令与无毒基因辐关的差舅表选片段，其中与Avrl摆关的为28个，Avr2 25个， Avr3-AvrlO-Avr21 23个，Avr4 23个。 5．利用B