实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用8-食品与发酵工业.PDFVIP

1—1802／ts．201503043 DOI：10．13995／j．cnki．1 实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用8 程海星，郭月英，任霆，张静，王乐，张利霞，靳烨 (内蒙古农业大学食品科学与工程学院，内蒙古呼和浩特，oI0018) 摘 要 实时荧光定量PCR技术是一种新兴的核酸定量分析技术，与普通PCR定性分析相比，具有简单高效、 准确灵敏、实时分析等更多的优势，是一项实用性很强的技术方法?文中主要对实时荧光定量PCR技术的操作 原理、荧光类型及其在食品检测和科学研究领域中的应用进行综述。 关键词 实时荧光定量PCR；荧光染料；探针；食品检测；直用 近年来，实时荧光定量PCR技术因其独特的优 每次循环PCR产物的总累积量，得到很好的定量结 点，被广泛的应用于兽医、畜牧、动物检疫、水产养殖 果。RTQ—PCR是在反应体系中加入荧光标记因子， 等研究领域，成为分子生物学研究中一项重要的技术 随着DNA的复制扩增，荧光信号不断增强，当仪器检 工具。在食品检测方面也都有了很大进展，包括致病 测到荧光信号强度达到设定的荧光阈值时，记录下此 菌检测、转基因食品检验、食品掺假检测等。 时的循环数(即CT值)，同时仪器自动绘制出扩增曲 线和熔解曲线。利用一系列的数学方法对得到的数 1 实时荧光定量PCR技术概述 据信息进行处理分析，达到实时定量检测DNA片段 1．1 实时荧光定量PCR技术基本原理 的目的4『。 chain 1．2 PCR(polymerasereaction)反应技术即为聚 实时荧光定量PCR技术分类 合酶链式反应，是模拟体内DNA复制的原理在体外 根据实时荧光定量PCR所用的荧光模式不同， 酶促合成特异DNA片段的一种方法，实时荧光定量 RTQ．PCR方法分为荧光染料法和荧光探针法2种。 fluorescent 1．2．1 PCR技术(real—time PCR， 荧光染料法 quantitative RTQ—PCR)是在此基础上发展起来的实时定量方法， 荧光染料法是在PCR体系中加入荧光染料，荧 Bio- 光染料能非特异性的结合到DNA双链的小沟中，通 它是1996年由美国应用生物系统公司(Applied 过荧光信号的积累监测反应进行，从而对目的基因进 systems)发明的，Heid等第一个发展了该方法，使用 行定量”。。SYBRGreenl是应用最广泛的一种荧光 Taqman探针以FAM和TAMRA分别作为荧光报告染 料和淬灭基团。。RTQ．PCR技术实现了PCR技术染料，仅能与DNA双链结合，结合到DNA双链上的 从定性到定量的突破，并且具有很多传统PCR技术 SYBR染料能够发射荧光信号，而没有结合的不会发 所没有的优点，能够应用于基因的定量检测，病原体 射，从而保证了荧光信号的增加与PCR产物的增加 的检测，肿瘤基因检测，基因的表达、突变及多态性分 完全同步。…。SYBRGreenl法因成本低廉，被普遍应 析等多种科学研究领域’2。 用于各种分子生物学实验研究。此外还有LCGreen TMl和Pico Greenl PCR反应由高温变性、低温退火(复性)和适温 Green等新型荧光染料，与SYBR