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桶装水中铜绿假单胞菌的检测 河南省疾病预防控制中心 炊慧霞 生物学特性 1 • 铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa ）原称绿脓杆菌，是重要 的水源和食源性致病菌，在自然界分布广泛（参考文 献）。 • 对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素及不良环境抵抗 力强，本菌对化学药物的抵抗力比一般革兰氏阴性菌 强大。1：2000 的洗必泰，度米芬和新洁尔灭，1： 5000的消毒净在5分钟内均可将其杀死。0.5-1%醋酸也 可迅速使其死亡，有些菌株对磺胺,链霉素,氯霉素敏感， 但极易产生耐药性。 生物学特性2 • 本菌属于假单胞菌属，是一种非发酵革兰阴性无芽孢杆菌，菌体 细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌 体的一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细 菌运动活泼。 • 氧化酶和过氧化氢酶阳性。O/F试验为氧化型，还原硝酸盐为亚硝 酸盐，分解乙酰胺产生N2 。98 ％菌株产生水溶性荧光色素。铜绿 假单胞菌能液化明胶，酪蛋白水解，但淀粉不水解。90 ％以上的 菌株产生蓝绿色色素。 • 分型 1）噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90% 。 2 ）血清学分型：利用O抗原进行分型，目前可分20个血清 型。该菌含有O抗原（菌体抗原）以及H抗原（鞭毛抗原）。O抗 原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是 脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。 3 ）质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不同株进行 同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。 致病性 • 主要致病物质是内毒素，此外尚有菌毛、荚膜、胞外 酶和外毒素等多种致病因子。可引起局部化脓性炎症 ，也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内 膜炎、脓胸，还可引起菌血症、败血症及引起婴儿严 重的流行性腹泻。 • WHO的HACCP评估明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装 饮用水的危害指示菌，可造成婴儿腹泻。尤其是抵抗 力较差的老弱病幼孕人群，饮用含铜绿假单胞菌的瓶 103 ~ 104 装水很可能导致疾病的发生，患者食入 个菌体细 胞即可被侵害。铜绿假单胞菌的生长还将增加亚硝酸 盐的含量-参考文献。 国内外污染情况-参考文献 • 国内污染情况： -瓶装天然矿泉水铜绿假单胞菌的检出率1.2％～23.6 ％； -瓶装饮用纯净水铜绿假单胞菌的检出率11.6％。 • 国外污染情况： -Richards等在104件检品中的4件分离到铜绿假单胞菌； -Rosenberg报告德国1.2％～10.2％的瓶装矿泉水检出铜 绿假单胞菌。 • 刚出厂的产品中铜绿假单胞菌数量较少，但有文献报 道5加仑桶装产品（15～31天的保存期），铜绿假单胞 4 10 菌可生长繁殖达到 CFU/ml 。 • 国内卫生标准：0 CFU/250ml GB/T 8538-2008 铜绿假单胞菌检测（滤膜法） 原 理 • 将250mL水样用孔径为0.45μm 的滤膜过滤，并 将滤膜移至CN琼脂培养基上，于36℃士1℃恒 温箱中培养48h ，能够在溴化十六烷基三甲铵 选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能 够在溴化十六烷基三甲铵选择性培养基上生长 并且氧化酶呈阳性、紫外光（360 ±20nm ）照 射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏 阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则 其检测结果为阳性。 培