细胞杀伤力曲线测定.docVIP

2012-10-10 DMEM/F12培养基配制 gibco D-MEM/F-12 CAT.NO.12500-062 LOT.NO.1206536 干粉培养基，每包装配1L。 直接溶于1L纯净水中，加2.438g碳酸氢钠，搅拌2小时，pH试纸检测中性。 0.22μm滤器过滤180ml培养基入250ml血清瓶。 5瓶180ml，1瓶不到180ml。 其中1瓶180ml培养基加入FBS 20ml。 2012-10-11 CHO-S细胞复苏： 41℃迅速溶解1min； 2ml细胞液+6ml DMEM/F12 10%FBS加入离心管，轻柔吹散。 离心1000rpm 5min； 弃上清； 加入3ml DMEM/F12 10%FBS，轻柔吹散,加入75ml细胞方瓶，补3ml DMEM/F12 10%FBS； 轻柔混匀，镜下观察，细胞密度85%-90%，细胞呈圆形悬浮； 37℃ CO2培养； 2012-10-12 细胞观察： 贴壁，90%密度； 95%呈圆形，少量有梭型倾向，密度过高，决定传代； 细胞传代：13:00 弃上清； 加入胰酶，2滴管（37℃回温）； 室温显微镜下观察，有微量脱落，1min； 倒出胰酶，加入5ml DMEM/F12 10%FBS，9区吹扫程序3次； 1传2，补2.5ml DMEM/F12 10%FBS； 原瓶中还有未脱落细胞，又加入5ml DMEM/F12 10%FBS