实验六质粒dna的制备.pptVIP

实验六 碱变性法小量制备质粒DNA 一．实验目的 掌握碱变性裂解法制备质粒DNA的原理。 掌握DNA分离纯化的基本操作技能。 二．实验背景 质粒是细菌染色体外的环形双链DNA分子，能在宿主细胞内独立自主的进行复制。 大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，以超螺旋形式存在。它是细菌内的共生型遗传因子。大小可从1kb到200kb。 质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活，而宿主即使没有它们也可以正常存活。 质粒的存在使宿主具有一些额外的特性，如对抗生素的抗性或致育因子等。 质粒类型 质粒按复制方式分为两种类型： 松弛型质粒 和 严紧型质粒 松弛型质粒 其复制不需要质粒编码的功能蛋白，完全依赖于宿主提供的半衰期较长的酶。质粒的拷贝数通常很高，有的甚至可达2000-3000拷贝/细胞。 2.严紧型质粒 严紧型质粒的复制受到严格控制，其拷贝数通常很低，每个细胞内只含有1 个或几个质粒分子 。 质粒的应用 大多数基因工程使用松弛型质粒。 严紧型质粒用来表达一些可使宿主细胞受毒害致死的基因。 质粒的特点使质粒成为携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介物， 这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值。 分离质粒DNA方法 从大肠杆菌中分离质粒DNA方法众多，目前