美洲南瓜α-微管蛋白CpTUA基因的分离及其作为内参基因的应用.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2018, 40(12): 2040–2050 DOI: 10.11844/cjcb.2018.12.0197 α CpTUA 美洲南瓜 -微管蛋白 基因的分离 及其作为内参基因的应用 朱海生 刘建汀 温文旭 叶新如 王彬 李永平 陈敏氡 林珲 温庆放* (福建省农业科学院作物研究所, 福建省农业科学院蔬菜研究中心, 福建省蔬菜工程技术研究中心, 福州 350013) 摘要 为了获得美洲南瓜α-tubulin基因, 并设计合适的荧光定量PCR 内参引物, 该研究通过 转录组测序和RT-PCR方法获得了1条长达1 863 bp的cDNA, 命名为CpTUA, GeneBank登录号为: MH310440 。生物信息学分析表明, 该序列包含1个开放读码框(open reading frame, ORF), 大小为1 报 353 bp, 预测共编码450个氨基酸, 理论分子大小约为49.57 kDa, 蛋白质等电点为4.84 。Motif Scan分 析显示, CpTUA蛋白质的氨基酸序列49―246位和248―393位分别为Tubulin和Tubulin-C保守区域。 同源性分析表明, 基因编码的蛋白质与同为南瓜属的中国南瓜和印度南瓜同源蛋白的相似性达到 99%, 具有高度的保守性 学 。在此基础上, 设计了1对的荧光定量PCR 引物, 该引物具有较高的特异性 和重复性。RT-PCR和qRT-PCR分析表明, CpTUA基因在美洲南瓜不同组织和不同胁迫处理下均能 稳定表达, 适合在美洲南瓜基因表达研究中作为内参基因。该研究为开展美洲南瓜重要功能基因 的表达模式和调控机制的研究奠定基础。 学 关键词 美洲南瓜; 内参基因; α-微管蛋白; 表达分析 物 Isolation of α-Tubulin CpTUA Gene from Cucurbita pepo and ’ It s Application as An Internal Standard 生 Zhu Haisheng, Liu Jianting, Wen Wenxu, Ye Xinru, Wang Bin, Li Yongping, Chen Mindong, Lin Hui, Wen Qingfang* (Crops Research Institute, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Vegetable Research Center, 胞 Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fujian Engineering Research Center for Vegetables, Fuzhou 350013, China) Abstract The study was to obtain the α-tubulin gene of zucchini and design the qRT-PCR pri