基础分子生物学.pptVIP

五、分子生物学的主要研究内容 一切生物体中的各类有机大分子都是由完全相同的单体，如蛋白质分子中的20种氨基酸、DNA及RNA中的8种碱基所组合而成的。 分子生物学研究的基本定理： 1.构成生物体有机大分子的单体在不同生物中都是相同的； 2.生物体内一切有机大分子的构成都遵循共同的规则 ； 3.某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质分子决定了它的属性。 生物体内各种大分子、亚细胞结构的大小 DNA重组技术 (基因工程) 基因表达调控 生物大分子结构功能 (结构分子生物学) 基因组、功能基因组与生物信息学 分子生物学研究主要包括： 是20世纪70年代初兴起的技术科学，目的是将不同DNA片段按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 DNA重组技术是核酸化学、蛋白质化学、酶工程及微生物学、遗传学、细胞学长期深入研究的结晶，而限制性内切酶、DNA连接酶及其他工具酶的发现与应用则是这一技术得以建立的关键。 DNA重组技术 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达。 基因工程技术是核酸操作技术的一部分，只不过它强调了外源核酸分子在另一种不同的寄主细胞中的繁衍与性状表达。 事实上，这种跨越物种屏障、把来自其它生物的基因置于新的寄主生物细胞之中的能力，是基因工程技术区别于其它技术的根本特征。 核酸的凝胶电泳 一种分子被放置到电场中，它就会以一定的速度移向适当的电极。我们把这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率，它与电场强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比，与片段大小成反比。 在凝胶电泳中，加入溴化乙锭（ethidium bromide，EtBr）染料对核酸分子进行染色，然后放置在紫外光下观察，可灵敏而快捷地检测出凝胶介质中DNA的谱带部位，即使每条DNA带中仅含有0.05μg的微量DNA，也可以被清晰地检测出来。 溴化乙锭染料的化学结构及其对DNA分子的插入作用。由于插入了溴化乙锭分子，在紫外光照射下，琼脂糖凝胶电泳中DNA的条带便呈现出橘黄色荧光，易于鉴定。 工具酶 限制性核酸内切酶能够识别DNA上的特定碱基序列并从这个位点切开DNA分子。 第一个核酸内切酶EcoRI是Boyer实验室在1972年发现的，它能特异性识别GAATTC序列，将双链DNA分子在这个位点切开并产生具有粘性末端的小片段。 几种主要DNA内切酶所识别的序列及其酶切末端. 基因克隆的载体 仅仅能在体外利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行DNA的切割和重组，还不能满足基因工程的要求，只有将它们连接到具备自主复制能力的DNA分子上，才能在寄主细胞中进行繁殖。 具备自主复制能力的DNA分子就是分子克隆的载体（vector）。病毒、噬菌体和质粒等小分子量复制子都可以作为基因导入的载体。 ?通过DNA连接酶把不同的DNA片段连接成一个整体。a. DNA的粘性末端; b. DNA的平末端; c. 化学合成的具有EcoRI粘性末端的DNA片段。 重组DNA操作过程示意图 可被用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低的多肽； 可用于定向改造某些生物的基因组结构，使它们所具备的特殊经济价值或功能得以成百上千倍地提高； 可被用于进行基础研究。 DNA重组技术具有广阔的应用前景 基因表达调控研究 蛋白质分子控制了细胞的一切代谢活动，而决定蛋白质结构和合成时序的信息都由核酸分子编码。 基因表达实质上就是遗传信息的转录和翻译过程。 基因表达调控研究的主要内容 信号转导研究 转录因子研究 RNA剪接研究 1. 信号转导 信号转导指外部信号通过细胞膜上的受体蛋白传到细胞内部，并激发诸如离子通透性、细胞形状或其他细胞功能方面的应答过程。 信号转导之所以能引起细胞功能的改变，主要是由于信号最后活化了某些蛋白质分子，使之发生构型变化，从而直接作用于靶位点，打开或关闭某些基因。 2. 转录因子 转录因子是一群能与基因5‘端上游特定序列专一结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。 3. RNA剪接 当真核基因转录成pre-mRNA后，除了在5’端加帽及3‘端加多聚A(poly(A))之外，还要切去隔开各个相邻编码区的内含子，使外显子相连后成为成熟mRNA。 生物大分子的结构功能研究(结构分子生物学) 是研究生物大分子特定的空间结构及结构的运动变化与其生物学功能关系的科学,主要研究方向: (1)结构的测定; (2)结构运动变化规律的探索; (3)结构与功能相互关系的建立。 研究三维结构的主要方法 X射线衍射的晶体学（又称蛋白质晶体学） 二维和多维核磁共振法液相结