活性氧在蓝萼甲素诱导的HL-60细胞凋亡中的作用分析.pdfVIP

1 ， 活性氧在蓝萼甲素诱导的HL．60细胞凋亡中的作用研究 中文摘要 中文摘要 抗菌消炎等活性，用于治疗胃炎，脘腹胀痛，肝炎初期，感冒发热，乳腺炎、关 节痛等疾病。近年来，大量文献报道香茶菜属植物普遍具有抗肿瘤活性，贝壳杉 烷形二萜类化合物是其活性成分。但蓝萼香茶菜抗肿瘤活性研究却鲜有报道。本 C；GLC)的抗肿瘤作用。运用多种方法检测GLA和 和蓝萼丙素(glaucocalyxin GLC诱导的凋亡，并对细胞凋亡的机制以及活性氧(reactive oxygenspecies；ROS) 在GLA诱导HL．60细胞凋亡中的作用进行了深入研究。目前，中医药研究的发展 趋势为采用分子生物学手段对祖国传统医学宝库中的中草药进行研究，对其药理 作用机制给予新的解释，开发出新的抗肿瘤药物，弘扬祖国传统医学。在这样的 前提下，深入探讨蓝萼甲素的抗肿瘤作用分子机制，是一项很有前景和研究价值 的课题。 方法：首先运用MTT法比较了GLA和GLC的细胞毒作用。此外，我们运用 V-FITC／PI双染方法，从细胞核形态，生化指标的变化检测细胞凋亡，并且利用流 3、8和9的活性。流式细胞仪 式细胞仪定量了凋亡率。分光光度法检测了caspase 和荧光显微镜检测了线粒体膜电位和ROS的爆发。氧电极法检测了氧耗量，同时 检测了MDA的含量以及抗氧化酶(CAT和SOD)活性。免疫荧光法检测了蓝萼 甲素对细胞色素C释放的影响。免疫印迹法检测了蓝萼甲素对Bax和Bcl．2蛋白 表达的影响。RT-PCR方法检测了蓝萼甲素对Fas基因表达的影响。同时利用MTT 法，流式细胞仪及荧光显微镜检测了抗氧化剂NAC对蓝萼甲素诱导HL．60细胞凋 亡的影响。 结果：GLA对所选择的15个肿瘤细胞株均具有显著的抗肿瘤活性，并呈现浓 度依赖性效应，HL．60为其最敏感的细胞株，IC50仅为0．33 I．tg／ml，而在所选的浓 中文摘要 活性氧在蓝萼甲素诱导的HL．60细胞凋亡中的作用研究 结合从而抑制Bcl．2的功能，促进细胞凋亡。GLA可以诱导HL．60细胞凋亡，凋 1．tg／m1)，具有浓度依赖性效 亡细胞百分率从7．80％(0}tg／rm)上升到40．60％(10 存活率，线粒体膜电位上升，细胞凋亡率下降。 结论：本文实验表明GLA能抑制HL．60细胞的生长及诱导细胞凋亡，但与 GLA结构非常相似的GLC没有抗肿瘤的活性。GLA通过内源性途径(线粒体途 过线粒体途径诱导的HL．60细胞凋亡，并起着重要作用。 关键词：蓝萼甲素；HL．60细胞；细胞凋亡；线粒体途径；活性氧 作 者：高立文 指导教师：王剑文 II Theeffectofreactive on A-induced inhumanleukemia oxygenspeciesglaucocalyxinapoptosis HL：鱼!型坠 垒堕壁堕t Theeffectofreactive on oxygenspecies cells A·-induced inhumanleukemiaHL--60