超高效液相色谱的发展背景.ppt

UPLC应用技术简介 生命科学研究中心 现代分析检测平台 高效液相色谱法– HPLC(High Performance Liquid Chromatography )– 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…– 广泛应用于各个领域:医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…– 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大的发展空间 ACQUITY H-Class 系统总揽 技术上的突破:UPLC色谱柱技术 ACQUITY UPLC H-Class主动预热 二、仪器介绍与理论基础 三、HPLC与UPLC比较 色谱条件的开发思路 根据分析物的化学性质选配色谱条件– 基于既往经验及思考进行合理猜测– 通常辅以资料参考– 询问同事“步进式”测试开发– 基于前一测试结果设计下一步的测试条件，逐步进行 系统性筛选策略– 先按流动相pH、有机相和固定相的直接组合进行系统性筛选测试o 评估结果，选择最有效的条件组合– 再进行方法优化o 梯度/温度 三、HPLC与UPLC比较 三、HPLC与UPLC比较 能够在一个工作日内完成方法开发!一、对pH、有机相和色谱柱的组合条件进行系统性筛查 二、高分辨亚二微米色谱柱技术确保高分辨分离在更快的同时分离能力不打折扣三、可自动选择色谱柱和流动相四、 四元溶剂混合使方法开发更方便 使用UPLC的一般建议 三、HPLC与UPLC比较 三、HPLC与UPLC比较 新鲜流动相的要求 器具使用通则 三、HPLC与UPLC比较 UPLC和HPLC区别 UPLC 法测定大鼠血浆中 Liguzinediol 浓度以及动力学研究 UPLC 测定草莓果实中类胡萝卜素含量 风信子花瓣花色苷组成分析 谷子茎尖组织中4种植物激素 谢谢大家！ UPLC 分析条件：色谱柱为 ACQUITYUPLC@BEH 的 C18 柱（ 2.1 mm × 100 mm， 1.7 μm）。柱温 45 ℃，流速 0.4 mL · min-1，进样体积 3 μL。流动相 A 液为 0.1%的甲酸溶液（ V 甲酸︰V 水 = 0.1︰99.9）； B 液为含 0.1%甲酸的乙腈（ V 甲酸︰V 乙腈 = 0.1︰99.9）。 梯度洗脱程序：0 min， 95% A， 5% B； 0.5 min， 95% A， 5% B； 2.5 min， 82% A， 18% B； 7.5 min， 65% A， 35% B；11 min， 35% A， 65% B； 12 min， 0% A， 100% B； 13 min， 0% A， 100% B； 13.5 min， 95% A， 5%B； 15 min， 95% A， 5% B。 在特征吸收波长 520 nm 处检测总花色 苷（ totalanthocyanins,TA）含量。 以标准品氯化矢车菊( cyanidin chloride，Sigma）作为外标，通过 标准曲线法对对花瓣 TA 进行定量。 TA 为每 g 新鲜花瓣中含有的相对于 cyanidin 的含量 四、应用与展望 * * 目 录 液相色谱历史回顾 1 仪器介绍与理论基础 2 HPLC与UPLC比较 3 应用和展望 4 色谱分离精度高，设备简单，操作方便，根据各种原理进行分离的色谱法不仅普遍应用于物质成分的定量分析和检测，而且广泛应用于生物物质的制备分离和纯化。是目前最好的生物纯化技术。 常见的分离方式 蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤 色谱 一、液相色谱历史回顾 液相色谱40年的发展史是颗粒技术的发展史。颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产生直接影响。由下图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。 一、液相色谱历史回顾 一、液相色谱历史回顾 自20世纪70年代以来，随着高效液相色谱(HPLC)技术的不断发展，美国Waters公司于2004年的匹兹堡会议上推出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱(UPLC)，其采用1．7 μm细粒径的新型固定相，可获得高达2万块／m理论塔板数的超高柱效，并以系统整体设计的创新技术，全面提升了液相色谱的速度、灵敏度和分离度，造就了液相色谱性能上的飞跃和进步并形成分离科学的一个新兴领域。 一、液相色谱历史回顾 超高效液相色谱的发展背景 首先是大量的样品需要在很短的时间内完成； 其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求； 第三是在与质谱等检测技术联用时，也提出了更高的要求。 将HPLC的极限作为自己的起点。 一、液相色谱历史回顾 二、仪器介绍与理论