人教版高中生物选修3专题1 第2节基因工程的基本操作程序课件.pptVIP

知 识 构 建 应 用 探 究 水稻种子中70%的磷以植酸形式存在。植酸易同铁、钙等金属离子或蛋白质结合排出体外，是多种动物的抗营养因子；同时，排出的大量磷进入水体易引起水华。 为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。 据图回答： (1)图中基因组文库________(小于/等于/大于)cDNA文库。 (2)B过程需要的酶是________；A、C过程中________(可以/不可以)使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。 (3)目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中________和________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是________。 [解析]　由于mRNA是以DNA一条链为模板转录出来的，所以A、C可以使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。 [答案]　(1)大于 (2)逆转录酶　可以 (3)DNA　cDNA　耐高温 * 2．表达载体的组成：启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因。 (1)目的基因　外源DNA分子的有效片段。 (2)启动子　一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶的识别和结合部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 (3)终止子　位于基因的尾端，也是一段有特殊结构的DNA短片段。终止子相当于一盏红色信号灯，使转录到此终止。 (4)标记基因　鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，如抗生素抗性基因就可以作为这种基因。 3．目的基因与载体的结合： 将目的基因与载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒为载体，将目的基因与质粒结合的步骤是： (1)用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口。 (2)用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端。 (3)将切下的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒。 4．差异性：由于受体细胞有动物、植物、微生物之分，加之目的基因导入受体细胞的方法不同，所以表达载体的构建也会有差异性。 知识贴士：①生物之间进行基因交流，需使用启动子和终止子才能比较有利于基因的表达。如通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中，此目的基因无法进行转录。 ②目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记。 ③为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等。 ④有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标记存在部位的基因(或做成目的基因与标记基因的融合基因)，如绿色荧光蛋白基因等。 下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切点。请回答下列问题： (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。 [解析]　(1)切割前质粒为环状，不含游离的磷酸基团。切割后质粒成了一个链状的双链DNA分子，含两个游离的磷酸基团。(2)因为SmaⅠ识别序列中均为G—C碱基对，G、C之间含三个氢键，热稳定性高。(3)据题图可知，SmaⅠ既会破坏标记基因，也会破坏目的基因。(4)若用同种限制性内切酶切割质粒和外源DNA中的目的基因，因为两端的黏性末端能够互补配对，会出现自身环化的情况。而用两种限制性内切酶切割，因为两端形成的黏性末端不能够互补配对，不会出现自身环化。(5)DNA连接酶可以连接具有能够互补配对黏性末端的DNA片段。(6)标记基因可以鉴别受体细胞是否含有目的基因。 [答案]　(1)0、2 (2)高 (3)SmaⅠ会破坏质粒的抗生素抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化 (5)DNA连接 (6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 (2015·聊城检测)下列关于基因表达载体的构建描述错误的是(　　) A．基因表达载体的构建是基因工程的核心 B．基因表达载体的构建包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分 C．目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因 D．构建的基因表达载体都是相同的 [答案]　D [解析]　基因表