人教版高中生物选修三1.2基因工程的基本操作程序同步课件.pptVIP

【探规寻律】　(1)PCR技术不需要解旋酶，但需利用90～95 ℃高温使DNA分子解旋。 (2)PCR技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物。 (3)PCR技术需要耐高温的DNA聚合酶 要点二　基因表达载体的构建 1.构建基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.基因表达载体的构建 (1)启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端。它是RNA聚合酶识别和结合的部位，可驱动基因转录。 (2)目的基因：编码相关蛋白质，形成基因工程产品或产生新的生物性状。 (3)终止子：一段有特殊结构的DNA短片段,位于基因的尾端，作用是使转录在所需要的地方停止。 (4)标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光基因等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因(目的基因是否导入成功)。 3.基因表达载体应具备的条件 (1)对受体细胞无害，不影响受体细胞的正常生理活动； (2)能自我复制，能通过复制进行基因扩增； (3)具有标记基因，以便于鉴定目的基因是否进入受体细胞； (4)重组DNA大小应适合，以方便操作。 特别提醒　(1)用同一种限制酶切割质粒和含目的基因的DNA分子的目的是产生相同的黏性末端，便于两者完成拼接。 (2)终止子与终止密码子的区别 ①终止子是DNA分子上决定转录停止的一段DNA序列，其组成单位是脱氧核苷酸； ②终止密码子是指mRNA分子上决定翻译停止的三个相邻碱基，其组成单位是核糖核苷酸。 (2012·南师大附中高二检测)如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因,P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别含有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。 例2 (1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoR Ⅰ 酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________________、________________、________________三种。若要从这些连接物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行______________________ ______________________________________。 (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________________________________________________________________________。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是________。 【答案】　(1)目的基因—载体连接物　载体—载体连接物　目的基因—目的基因连接物　分离纯化 (2)载体—载体连接物 (3)启动子　mRNA (4)EcoRⅠ和BamHⅠ(只答一种酶不可) 【误区警示】　(1)切割质粒和目的基因的限制酶一般是同一种酶，以获得互补的末端，利于重组质粒的构建。 (2)目的基因的首端和尾端需加上启动子和终止子。 要点三　将目的基因导入受体细胞 不同受体细胞的常用导入方法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 以农杆菌转化法为例 将目的基因插入Ti质粒的TDNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取受精卵→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 特别提醒　(1)完成基因表达载体的构建，需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。 (2)Ca2＋(或CaCl2溶液)对微生物细胞的作用是增加细胞壁的通透性。 (3)目的基因能否在植株细胞内稳定保存并表达的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上(利用的原理是基因重组)。 科学家通过基因工程的方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示，请分析回答： 例3 (1)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有TDNA，把目的基因插入Ti质