农杆菌介导的Pr基因对非洲菊遗传转化的研究-亚热带植物科学.PDFVIP

2008,37(1):6-11. Subtropical Plant Science 农杆菌介导的 Pr 基因对非洲菊遗传转化的研究 叶文飚 (厦门北大之路生物工程有限公司, 福建 厦门 361009) 摘 要：采用农杆菌介导法将 Pr 基因转入非洲菊（Gerbera hybrida ），建立适合于农杆菌介导的基因遗传转 化受体系统，获得再生植株。经 PCR 和 GUS 染色检测，Pr 基因成功转入非洲菊幼苗。 关键词：非洲菊；Pr 基因；遗传转化 中图分类号：Q943.2 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0006-06 Study on Genetic Transformation of Pr Gene to Gerbera hybrida Through Agrobacterium YE Wen-biao (Xiamen Bioway Biotech CO., LTD., Xiamen 361009, Fujian China) Abstract: We transformed the Pr gene to Gerbera hybrida via agrobacterium-mediated transformation, established an efficient system of genetic transformation for agrobacterium and obtained regeneration plantlets. PCR and GUS analysis confirmed the integration and expression of the transgene. Key words: Gerbera hybrida; Pr gene; genetic transformation 非洲菊（Gerbera hybrida）是极为普遍的鲜切花之一，对其花色改良有较大的商业价值。尽管传统 杂交育种手段仍是非洲菊遗传改良的主要途径，但以基因工程技术为基础的花色改良已受到众多关注。 Fukada-Tanaka等[1]从牵牛中克隆的Pr基因，是第一个被鉴定为可提高花瓣液泡pH值而使花色变蓝 的基因。Pr基因的cDNA序列长2.3Kb ，包含一个完整的与拟南芥及水稻液泡Na+ + /H 交换器（exchanger ） 高度同源的开放阅读框，因而 基因被认为也编码一个 +/H+交换器。 +/H+交换器被认为在 +-ATPase Pr Na Na H + + + + 及H -pyrophosphatase （H -焦磷酸酶）所形成的H 梯度下把Na 转运进液泡，使液泡pH值几乎达到8.0， 以致花色变蓝。 自然界中不存在蓝色非洲菊，但通过基因工程技术将Pr 基因导入非洲菊，则有可能培育出蓝色品 种。本研究应用农杆菌介导的转化方法，建立了非洲菊遗传转化体系，率先将 Pr 基因转入非洲菊中， 获得转基因植株，为进一步研究 Pr 基因对其花色的影响奠定了基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 植物材料 非洲菊[Gerbera hybrida(喜庆 Festival F1)]红色品系，购自大连世纪种苗有限公司。 1.1.2 菌株与质粒 大肠杆菌转化的受体菌为北京大学生命科学学院保存的 Escherichia coli DH5α。用 于非洲菊转化的质粒为经过改造 pCAMBIA3