发酵实验报告.docVIP

PAGE 1 《发酵工程原理》综合实验 ——小型发酵罐的使用与发酵过程监测与分析 学院名称：食品学院 年级专业：09级生物工程 实验日期2011.11.23-25 摘 要 \o 查看图片 发酵罐是用于培养微生物或细胞的封闭容器或生物反应装置。可用于研究、分析或生产。有多种在材料、大小和形状上各异的产品。最常用的为全搅拌罐式反应器。 发酵罐广泛应用于乳制品、饮料、生物工程、制药、精细化工等行业，罐体设有夹层、保温层、可加热、冷却、保温。罐体与上下填充头（或雏形）均采用旋压R角加工，罐内壁经镜面抛光处理，无卫生死角，而全封闭设计确保物料始终处一无污染的状态下混合、发酵，设备配备空气呼吸孔，CIP清洗喷头，人孔等装置。 本实验通过控制合适的培养条件，使大肠杆菌迅速持续生长，在发酵过程中定时取样测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖的变化了解发酵过程中菌体生长及对培养基的利用情况。 关键词：大肠杆菌 液体发酵 最大比生长速率 平均细胞得率系数 目 录 TOC \o 1-3 \h \z \u 前 言 4 1 材料与设备 4 1.1 材料 4 1.1.1 菌种 4 1.1.2 培养基 4 1.1.3 其他材料 4 1.2 设备 5 2 实验方法 5 2.1 流程 5 2.2 菌种准备 5 2.2.1 配制培养基 5 2.2.2 接种与培养 5 2.3 上罐前的准备 6 2.4 实罐灭菌 6 2.5 发酵操作 7 2.5.1 取样 7 2.5.2 接种 7 2.5.3 电脑监控 7 2.5.4 发酵管理 7 2.6 发酵过程中各项生理指标的测定 7 2.6.1 OD值测定 7 2.6.2 葡萄糖测定 8 2.7 放罐清洗 9 3 结果与分析 9 3.1 菌体浓度与吸光值关系标准曲线 9 3.2 发酵过程各参数变化规律 9 3.2.1干菌体浓度 9 3.2.2 葡萄糖浓度 10 3.2.3 pH值、DO值和其他一些参数 11 3.3 各参数整理与分析 11 3.4 最大比生长速率 13 3.5 平均细胞得率系数 15 3.6实验操作对实验结果的影响 15 3.6.1 菌种活化与一级菌种、二级菌种的制备 15 3.6.2 摇床 15 3.6.3 上罐前管理 15 3.6.4 实罐灭菌 16 3.6.5 接种时管理 16 3.6.6 发酵时管理 16 3.6.7 OD值测定 17 3.6.8 还原糖测定 17 3.6.9 试验中遇到的问题及猜想 17 参 考 文 献 18 前 言 发酵罐是进行液体发酵的专用设备。实验室使用的小型发酵罐，其体积可从1L至数百升。一般5L以下是用耐压玻璃制作罐体，10L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备控制系统，它主要是对发酵过程中的各种参数如温度、pH、溶解氧、搅拌速度、空气流量、补料、泡沫水平等进行设定、显示、记录以及对这些参数进行反馈调节控制。 大肠杆菌（E.coli）是遗传工程研究过程中常用的受体菌，对大肠杆菌的遗传背景和生理特性研究已相当彻底，已有很多不同抗药性、不同营养依赖型和不同校正突变型的菌种供选择应用，可以根据不同的载体而选择不同的菌种。大肠杆菌在营养条件充足时，20～30min即可繁殖一代，而且大规模发酵成本低，具有巨大的生产潜力 为了解发酵过程中菌体的生长及对培养基的利用情况，需在发酵过程中定时地取样测定。包括对菌体进行镜检、测定不同时期发酵液的细菌浊度及残留还原糖（RG）的变化等。 1 材料与设备 1.1 材料 1.1.1 菌种 大肠杆菌（E.coli） 1.1.2 培养基 种子培养基：葡萄糖10g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g，氯化钠5g，水1000mL。pH7.0。 发酵培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏10g，氯化钠5g，氯化铵5g，水1000mL。pH7.0。 全部用自来水配制培养基。 1.1.3 其他材料 泡敌、斐林试剂、0.1%标准葡萄糖溶液、40%氢氧化钠等。 1.2 设备 BIOTECH-7BGZ发酵罐1套（配套蠕动泵、pH电极、溶氧(DO)电极、空压机及所有连接管）、分光光度计、旋转式摇床、离心机、恒温培养箱等。 2 实验方法 2.1 流程 图1 发酵过程流程 2.2 菌种准备 2.2.1 配制培养基 配制种子固体培养基100mL，分装试管，0.1Mpa（121℃）灭菌20min，摆成斜面。 配制种子培养液600mL，分别分装50mL于两个2