甲基化DNA的富集小磁珠立大功选购宝典-生物通.pdfVIP

甲基化DNA 的富集 小磁珠立大功 两个遗传上完全相同的双胞胎，他们为什么常常有着不同的疾病易感性？黑猩猩的基因组与人类非 常相似，但为什么与人的差异那么大？这就是 DNA 甲基化的魔力。多年来，甲基化被认为在抑制基因 表达上扮演了重要角色。尽管甲基化在基因表达上的确切作用仍不清楚，但 DNA 甲基化对细胞分化和 胚胎发育很关键。于是，生物通这一次就将目光投向甲基化检测。 在具体介绍甲基化检测的技术之前，我们先来 Invitrogen的MethylMiner™ Methylated DNA 插一段甲基化 DNA 的富集。许多研究人员都会在 Enrichment Kit也是类似，可采用多种洗脱方法。 亚硫酸氢盐转化之前富集甲基化的 DNA。一来可 包括：1) 使用未稀释高盐洗脱缓冲液进行一步洗 降低背景，二来也可节约成本。目前有两种基本方 脱；2) 使用含蛋白酶 K 的溶液进行一步洗脱；3) 法，一个是利用 5’- 甲基胞嘧啶的抗体来捕获甲基 使用浓度递增的 NaCl 缓冲液进行连续阶段洗 化 DNA，即甲基-DNA 免疫沉淀（MeDIP）；另一 脱；或 4) 先采用连续梯度洗脱，最后采用蛋白酶 个是利用包含了甲基-CpG 结合结构域（MBD）的 K进行处理。点击索取资料 蛋白来得到同样的结果。 在 NEB 的 EpiMark™ Methylated DNA 目前市场上的大部分产品都是利用后一种方 Enrichment Kit中，甲基化DNA与融合了Fc尾巴的 法。这两种方法的差别在于 MeDIP 是在单链 DNA 人MBD2a蛋白结合，这个Fc尾巴又与亲水性蛋白A 的背景下特异识别 5’- 甲基胞嘧啶，而后者更偏爱 磁珠偶联。每个蛋白A上结合了两个Fc，而Fc片段 双链 DNA。MBD 的另外一个优势是：在利用蛋白 是二聚体，因此每个蛋白A分子暴露了四个MBD2 酶 K 将免疫沉淀后的 DNA 洗脱下来时，MBD2 中 结构域，使相对平衡系数提高了 100 倍。这种稳 的甲基化 DNA 可根据盐梯度而逐步释放。这样， 定的复合物能选择性地结合双链甲基化DNA。 点击 你就能区分不同程度的甲基化 DNA。 索取资料 默克密理博公司的CpG MethyIQuest™ DNA Isolation Kit利用GST-MBD2b蛋白预包被的磁珠 来富集甲基化DNA，简单又快速，只需 2 小时即 可完成。CpG MethylQuest MBD蛋白特异性结合 甲基化DNA，而不与非甲基化或半甲基化DNA结 合，保证了结果的特异性。且不论样本体积是 1 ng， 还是 1 μg，都有出色的表现。点击索取资料 Clontech 的 EpiXplore Methylated DNA Enrichment Kit 采用的也是磁珠法，从全基因组中 富集甲基化的 DNA。它的操作步骤很灵活，可根 据甲基化密度（低、中、高）将甲基化 DNA 分成 三个组分，逐步洗脱，而不是像抗体那样，要么全 部，要么没有。 2011年7月22日第八十七期 第 2 页，共 33 页 下一页 返回 ActiveMotif 的MethylCollector™ Ultra 偶联了 员验证实验结果，现在许多用户都倾向于平行分 MBD2b 和 MBD3L1，产生出一个异源二聚体蛋白， 析。如果 MethylCollector 没有结果，那么你可以 这样与甲基化-CpG 的亲和力也增加了。有意思的 假 设 样 品 是 未 甲 基 化 的 ， 之 后 用 是 ， ActiveMot