BcA9启动子调控的反义BcMF12对白菜基因沉默的效果.docVIP

PAGE 1412 中 国 农 业 科 学 41卷 5期 宋江华等：BcA9启动子调控的反义BcMF12对白菜基因沉默的效果 PAGE 1411 中国农业科学 2008,41(5):1410-1415 Scientia Agricultura Sinica 收稿日期：2007-01- 基金项目：国家自然科学基金项目及浙江省重大科技项目（2005C12019-02） 作者简介：宋江华（1980-），女，山西长治人，讲师，博士，研究方向为植物基因组及其分子调控。E-mail： jianghua_80@126.com。通讯作者曹家树（1958-），男，湖南芷江人，教授，研究方向为植物基因组及其分子调控。Tel：0571Fax：0571E-mail： jshcao@ BcA9启动子调控的反义BcMF12对白菜基因沉默的效果 宋江华1，2，朱熠鹏1，余小林1，向 珣1，曹家树1 （1浙江大学蔬菜研究所，杭州 310029；2安徽农业大学园艺学院，合肥 230036） 摘要：【目的】探讨花药绒毡层特异启动子BcA9调控的反义BcMF12基因对白菜（Brassica campestris L. ssp. chinensis, syn. B. rapa L. ssp. chinensis）基因沉默的效果，明确其对花粉发育的影响。【方法】在从白菜花蕾cDNA中克隆BcMF12基因的保守区段的基础上，将白菜花药特异表达启动子BcA9与反义BcMF12基因融合，构建反义表达载体，并经农杆菌介导导入到白菜基因组中，利用抗生素筛选和分子检测筛选出转基因植株。【结果】PCR和Southern检测结果表明，BcA9启动子驱动的反义BcMF12-GUS报告基因已整合到白菜基因组中；Northern杂交显示转基因植株花蕾和花中的BcMF12在mRNA水平的表达明显受到抑制，而且花粉萌发率显著下降。【结论】BcA9调控的反义BcMF12基因明显抑制了BcMF12的表达，从而影响白菜花粉的发育。 关键词：白菜；BcMF12；BcA9启动子；反义RNA；基因表达；GUS活性 Effect of the Antisense BcMF12 Driven by the BcA9 Promoter on Gene Silencing in Brassica campestris L. ssp. chinensis SONG Jiang-hua1,2, ZHU Yi-peng1, YU Xiao-lin1, XIANG Xun1, CAO Jia-shu1 (1Institute of Vegetable Science, Zhejiang University, Hangzhou 310029; 2College of Horticulture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036) Abstract: 【Objective】 This study analyzed the silencing of BcMF12 gene regulated by BcA9 promoter in the transgenic pakchoi, and confirmed the effect of antisense BcMF12 gene on the pollen development.【Method】A conserved BcMF12 gene fragment was amplified from the cDNA of flower buds in pakchoi (Brassica campestris L. ssp. chinensis, syn. B. rapa L. ssp. chinensis), and was fused to the anther specific BcA9 promoter. The plant antisense expression vector was constructed and then introduced into pakchoi via Agrobacterium-mediated transformation. The transgenic plants were screened by antibiotics and molecular analysis.【Result】 PCR and Southern blot revealed that