分子生物学-8真核生物基因表达调控.ppt

真核生物基因的表达调控 主要内容 概述 染色体水平上的调控 染色质水平上的调控 DNA水平上的调控 真核细胞Ⅱ类基因的调控区 真核细胞Ⅱ类基因的转录调控因子 一、概述 二、染色体水平上的调控 典型例子是免疫球蛋白基因的表达 三、染色质水平上的调控 由组蛋白和DNA组成的染色质结构限制了转录因子对DNA的接近与结合，实际上起着阻遏转录的作用。 基因转录需要染色质发生一系列重要的变化，如染色质去凝集，核小体变成开放式的疏松结构，使转录因子等更容易接近并结合核小体DNA。 有两种方式可以显著改变DNA的易接近性：组蛋白的乙酰化和核小体重塑。 正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一条在遗传上有活性的，另一条无活性。 失活是随机的。 Example:玳瑁猫 每种核心组蛋白包括一个～80个氨基酸残基构成的保守的区域称为组蛋白折叠域（histone fold domain）和一个突出于核小体核心之外、由20个氨基酸残基组成的N端尾。 N端尾的相互作用对核小体的聚集和染色质折叠非常重要，也是组蛋白的主要修饰部位。 在含有活性基因的染色体结构域中，组蛋白乙酰化程度增加，组蛋白甲基化程度减少 during DNA replication; when genes are activated 组蛋白乙酰化酶 (Histone acetyltransferase，HATs) 组蛋白去乙酰化酶 (Histone deacetylase，HDACs) 2.H1组蛋白磷酸化 H1组蛋白对核小体起装配作用，确定核小体方向性，并将基本的串珠进一步组装到30nm的纤维中。 H1组蛋白磷酸化后与DNA亲和力下降，造成染色质疏松，可提高染色质的活性 有丝分裂中H1的磷酸化导致其对DNA的亲和力下降，可能与具有转录活性的染色质伸展状态相似。 1、组蛋白H1与染色质结合不紧密； 2、4种核内组蛋白含量虽然正常，但是乙酰化程度比非活性染色质的高； 3、活性染色质中，组蛋白H2B很少磷酸化； 4、核小体结构结合了两种小分子量的非组蛋白HMG14和HMG17； 5、组蛋白H3的巯基暴露。 6.处于转录活化的染色质区域，对DNaseI敏感性比无转录活性区高得多 染色质重塑涉及在基因组一个较短的区域中核小体位置的改变或者结构的改变，是一个能量依赖的过程，由染色质重塑复合物（chromatin remodeling complex）催化完成。 SWI/SNF类复合物有解旋酶活性，在ATP作用下，使核小体DNA螺旋程度降低，组蛋白八聚体沿DNA移动，核小体结构松散。 （5）新的转录因子与DNA结合。 （6）RNA聚合酶与DNA结合。 （7）转录起始需要来自于特异性转录因子经中介复合体传递来的正调控信号。 处于转录活化的染色质区域，对DNaseI敏感性比无转录活性区高得多。 是由于此区域染色质结构变得松散， DNaseI易于接触到DNA。 对DNaseI敏感性只反映该基因具有被转录的潜能。并不反映该基因一定在转录。 DNaseI超敏感位点（ DNaseI HyperSensitive Sites，DHSS)：大多位于基因5′端启动子区域，少数位于其他部位。 超敏感位点实际上是一段100-200 bp 的DNA序列特异暴露的区域，可能被一些非组蛋白结合而抑制了同组蛋白结合，失去了组蛋白的保护。 5’端调控位点，起初级调控作用，它即是一簇超敏感位点。 是染色体DNA上一种顺式作用元件，结构域中含有多种反式作用因子的结合序列，可能参与蛋白质因子的协同作用，使启动子处于无组蛋白状态。 LCR是一种远距离顺式调控元件 使LCR界限之内的基因具有潜在活化的可能 是基因簇中每个基因表达所必需的 人类的β－珠蛋白基因簇长约60 Kb，含有5个功能基因，它们的排列顺序是5’－ ε－γG－γA－δ－β－3’。 其中ε在胚胎早期表达，γG和γA在胎儿时期表达，δ和β在成体中表达。 每个β－珠蛋白基因都有自己的一套调控系统，但它们的表达还要受到基因簇上游12 Kb的基因座控制区（locus control region, LCR）的控制。 人类β－珠蛋白基因LCR的增强子活性已由实验证明。将连接或不连接LCR的人类β－珠蛋白基因分别转化小鼠细胞。 研究发现，如果缺少LCR，β－珠蛋白基因转录水平通常不到内源小鼠β－珠蛋白基因的1％。 若是连接上LCR，外源β－珠蛋白基因的表达水平与小鼠自身的β－珠蛋白基因的表达水平相当。 在靠近MAR位点的地方经常有拓扑异构酶II的识别位点，意味着每一个巨大的环状DNA的超螺旋程度受到独立的调控。增强子以及其他调控元件也经常靠近MAR位点。 在某些情况下，染色质重塑也是从MAR位点开始的，并且影响整个染色质环。 绝缘子是一组在真核生