猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析.docVIP

PAGE 388 中 国 农 业 科 学 40卷 2期 骆学农等：猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析 PAGE 387 中国农业科学 2007,40(2):385-390 Scientia Agricultura Sinica 收稿日期：2005-09-20；接受日期：2006-09-26 基金项目：国家重大基础研究发展规划“973” 作者简介： 骆学农（1969-），男，甘肃永登人，博士，研究方向为寄生虫分子生物学和免疫学。Tel：0931-8342716；E-mail：xuenongluo@。通讯作者才学鹏（1958-），男，黑龙江鸡西人，研究员，博士，研究方向为寄生虫分子生物学。Tel：0931-8342535；E-mail：caixp@ 猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合 表达及保护性分析 骆学农，郑亚东，窦永喜，郭爱疆，侯俊琳，景志忠，才学鹏 （中国农业科学院兰州兽医研究所 / 家畜疫病病原生物学国家重点实验室／甘肃省动物寄生虫病重点实验室，兰州 730046） 摘要:【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原，为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列，经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX－4T-1连接转化BL21感受态细胞，酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接，构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物，进行SDS－PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪，间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率，比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物为50 kD的融合蛋白，并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值，联合表达重组抗原的减虫率为97%，GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX 和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果，有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。 关键词:猪带绦虫; 45W-4BX；18kD；联合表达；免疫保护性分析 Combining Expression and Protective Efficacy of 45W-4BX and 18kD from Different Stages of Taenia solium LUO Xue-nong, ZHENG Ya-dong, DOU Yong-xi, GUO Ai-jiang, HOU Jun-lin, JING Zhi-zhong, CAI Xue-peng (Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province / State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology Lanzhou Veterinary Research Institute / Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046) Abstract: 【Objective】The study aimed looked at the efficacy of the recombinant antigen of co-expressed 45W-4BX and 18kD from Taenia solium different development stages.【Method】 Truncated 45W-4B with the signal peptide sequence deletion and C’-terminal nucleotides encoding, 17 hydrophobic amino acids were cloned into BamH I and EcoR I pre-digested pGEX-4T-1 and transformed into competent BL21.The positive transformants were determined by enzyme restriction, PCR, and sequencing. This was followed by